[发明专利]一种提高免疫力的益生菌组合物及其制备方法

权利要求书

1.一种提高免疫力的益生菌组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.菌种的活化：将凝结芽孢杆菌TQ33、枯草芽孢杆菌和富硒酵母分别接种到高氏培养基中，微氧条件下培养成菌种种子液；所述菌种种子液的含菌量为10⁷-10⁹cfu/mL；

S2.黄豆的处理：将黄豆洗净、煮熟后，粉碎，得到熟黄豆粉；

S3.黄豆的初步发酵处理：将步骤S1中活化的枯草芽孢杆菌菌种种子液接种到步骤S2中得到的熟黄豆粉中，微氧条件下，发酵培养，得到初步发酵处理的黄豆；所述枯草芽孢杆菌的接种量为5-10%；所述发酵培养温度为35-39℃，时间为12-24h；；

S4.中药的提取：将党参、连翘分别洗净后，干燥，粉碎，加入水中微波沸腾提取，过滤，滤液浓缩干燥，得到中药水提取物；所述党参、连翘的质量比为（5-10）：2；

S5.液体培养基的制备：将黄芪甲苷、山药多糖、碳源、氮源和无机盐用无菌水溶解，混合均匀后，用PBS溶液调节培养基pH值，灭菌备用；所述黄芪甲苷、山药多糖、碳源、氮源、无机盐和无菌水的质量比为（1-2）：（3-5）：（15-25）：（7-15）：（1-3）：1000；

S6.发酵：将步骤S3中得到的初步发酵处理的黄豆、步骤S4制得的中药水提取物加入步骤S5中制得的液体培养基中，接种步骤S1中活化的凝结芽孢杆菌TQ33和富硒酵母菌种种子液，微氧条件下，发酵培养，得到发酵产物；所述初步发酵处理的黄豆、中药水提取物、液体培养基的质量比为（5-12）：（2-5）：20；所述凝结芽孢杆菌TQ33的接种量为2-5%；所述富硒酵母的接种量为4-7%；所述发酵培养条件为35-38℃，培养24-36h；

S7.促发酵：将维生素加入步骤S6中的发酵产物中，微氧条件下，发酵培养第一时间段后，加入氨基酸，微氧条件下，发酵培养第二时间段，得到提高免疫力的益生菌组合物；

所述发酵培养条件为35-38℃，所述第一时间段为8-12h，所述第二时间段为24-48h；

所述微氧条件为氧含量为5-10%，二氧化碳含量为3-7%，余量为氮气，其中，%为体积百分比。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S4中所述微波沸腾提取次数为2-3次，微波功率为1000-1500W，每次提取时间为1-2h。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S5中所述碳源选自糖蜜、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、果糖、可溶性淀粉中的至少一种；所述氮源选自氨水、尿素、铵盐、硝酸盐、鱼粉中的至少一种；所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、硫酸镁、氯化亚铁、硫酸亚铁、氯化铁、硫酸锌、硫酸铜、硫酸锰、氯化锌、氯化铜、氯化锰中的至少一种；所述PBS溶液调节培养基pH值至6.8-7.2。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述维生素选自维生素C、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素A、维生素K、维生素D、维生素E中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述氨基酸选自甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸、亮氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、苯氨酸、牛磺酸中的至少一种。