[发明专利]黑老虎果皮中三萜酸化合物的制备方法

说明书

一种黑老虎果皮中三萜酸化合物的制备方法，是取黑老虎果皮干燥，粉碎，用乙醇超声提取，滤液蒸发浓缩至膏状，除去水溶部分，得水不溶浸膏；再进行高速逆流色谱分离，收集目标组分，得到纯度大于95％的化合物Seco‑neolcadsaranic acid A、Neokadsuranic acid A。本方法简便、快速、重现性好，适宜大量制备，为三萜类化合物的进一步活性研究奠定物质基础。

技术领域

本发明涉及从植物中提取三萜酸化合物，具体涉及一种从黑老虎果皮中分离制备三萜酸化合物的方法。

背景技术

黑老虎(Kadsura coccinea(Lem.)A.C.Smith)别名为冷饭团、布福娜等，是五味子科南五味子属植物，其根为一种常用中药，性温，味辛、微苦，具有行气止痛、祛风活络、散癖消肿之功效，在民间常用于治疗胃、十二指肠溃疡、慢性胃炎、急性胃肠炎、风湿性关节炎、跌打肿痛、痛经、产后癖血腹痛等症。

近年来，国内外研究者主要采用传统硅胶柱层析方法，从五味子属植物中分离出五百多个化学成分，其中木脂素类约三百多个、三萜类近二百个，这些成分多具有抗HIV活性、抗血小板凝聚、抗肿瘤、抗乙型肝炎病毒等方面的活性，因此，从南五味子属植物中寻找和发现新结构以及新活性成为研究热点。

查阅文献可知，目前从黑老虎植物中分离制备三萜类化合物主要是从根中获得，且均是采用反复硅胶柱层析或硅胶柱层析联合制备液相方法，该方法操作复杂、重现性差、耗时长，化合物有不可逆吸附等缺点。

发明内容

本发明的目的是，针对上述现有技术的不足，提供一种采用高速逆流色谱从黑老虎果皮中分离制备三萜酸化合物的方法。

为达上述目的，本发明采用的技术方案是：一种黑老虎果皮中三萜酸化合物的制备方法，该方法步骤如下：

A.取黑老虎果皮干燥，粉碎，用乙醇于室温下超声提取，得粗提液，将粗提液蒸发浓缩至膏状，再用蒸馏水超声提取除去水溶部分后用甲醇溶解，水浴挥干甲醇，得水不溶浸膏；

上述所提的用乙醇于室温下超声提取是指按100g黑老虎果皮粉末加0.8L质量分数为60-80％的乙醇的量，于黑老虎果皮粉中加入乙醇，于室温下超声波提取55-65min，抽滤，滤渣再用60-80％％质量分数的乙醇室温下超声提取若干次，每次提取25-35min，抽滤，合并滤液，即得粗提液。其中，滤渣超声提取时，随着提取次数的增加每次乙醇的用量可适当减少，如第1次为0.4L时，下次可为0.1L。

上述所提的用蒸馏水超声提取除去水溶部分是指于蒸发浓缩成的膏状物中加入蒸馏水，室温下超声提取，抽滤，滤渣再加入蒸馏水于室温下超声提取一次，抽滤，弃去滤液，滤渣备用；其中，每次提取时蒸馏水的加入量为膏状物质量的10-15倍。

较佳的，黑老虎果皮干燥的温度为55-65℃；甲醇挥干时的水浴温度为90-100℃。

B.选择高速逆流色谱的溶剂体系：石油醚、乙酸乙酯、甲醇和蒸馏水按体积比9:3:6:1混合；其中，该溶剂体系的上相为固定相，下相为流动相。

C.用高速逆流色谱溶剂体系的下相超声溶解步骤A所得的水不溶浸膏，进行高速逆流色谱分离，收集出峰时间110min-125min内的流分，得到化合物Seco-neolcadsaranicacid A，收集出峰时间175min-190min内的流分，得到化合物Neokadsuranic acid A；其中，高速逆流色谱分离条件为：流速2mL/min，主机转速850rpm，温度20℃，检测波长254nm。