[发明专利]一种离子色谱法测定利福平或利福喷丁中亚硝酸根的方法

说明书

本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种离子色谱法测定利福平或利福喷丁中亚硝酸根的方法，包括以下步骤：取利福平或利福喷丁原料药，经甲醇和去离子水组成的稀释液溶解后，采用RP固相萃取柱去除杂质，收集第6mL续滤液作为供试品溶液，备用；取空白样品稀释液，然后加入亚硝酸根标准溶液，配制成不同浓度的对照品溶液，备用；将所述供试品溶液和所述不同浓度的对照品溶液在预设的离子色谱条件下分别进行，根据不同浓度的对照品溶液的检测结果制作标准曲线，再根据标准曲线和供试品溶液的检测结果计算供试品溶液中亚硝酸根的含量。利用本发明提供的方法测定利福平或利福喷丁中的亚硝酸根，具有良好的线性、准确度、定量限和检测限。

技术领域

本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种离子色谱法测定利福平或利福喷丁中亚硝酸根的方法。

背景技术

遗传毒性杂质(GenotoxicImpurities，GTI)，是指能够直接或间接损伤细胞DNA，造成DNA突变并伴有致癌性危害人类健康的物质。

近年来，药物中发现亚硝胺类遗传毒性杂质事件层出不穷。例如2018年，华海药业在缬沙坦原料药中检测出微量的遗传毒性杂质N-亚硝基二甲胺(NDMA)后。亚硝胺类杂质事件引起了业内的广泛关注。2019年3月，氯沙坦钾中NMBA超出控制限度。同年9月，FDA发布安全警告称，在雷尼替丁中检出遗传毒性杂质NDMA。紧接着FDA又在降糖药二甲双胍中检出微量NDMA。2020年7月，WHO公布赛诺菲公司的利福喷丁中发现的亚硝胺杂质。

遗传毒性杂质会对患者产生极大危害，极微量水平即可诱发DNA突变。因此对遗传毒性杂质的评价和限度控制分析至关重要。从杂质来源看，将杂质完全清除是不可实现的，也没有必要。只有通过合适的分析方法，并掌握杂质的成因才能对杂质的产生进行有效的控制，从而降低患者服用药物时对身体造成的危害，并为企业生产工艺的提升提供改进策略。

亚硝胺类化合物的产生的原因多样，包括药物合成中发生副反应，生成具有遗传毒性的N-亚硝胺类杂质，如仲胺类化合物与亚硝酸等亚硝化试剂相互作用；药物储存过程中发生氧化还原反应，如雷尼替丁中的结构中一个不稳定的二甲氨基，降解产生NDMA等。

根据利福平、利福喷丁与其遗传毒性杂质1-甲基-4亚硝基哌嗪(MNP)、1-环戊基-4-亚硝基哌嗪(CPNP)结构可知，利福平或利福喷丁中亚硝基中N原子有可能来源于活性成分或辅料总残留的亚硝化试剂亚硝酸根离子。因此很有必要对利福平或利福喷丁原料及制剂中的亚硝酸根离子含量进行检测，以确定亚硝胺杂质中N原子的来源，从而可以进行更好的质控。

目前，对于亚硝酸盐的测定通常采取离子色谱法、滴定法、比色法、紫外-可见分光光度法等。其中，离子色谱法具有简便、快速、灵敏、选择性高的特点，因此在药物和食品中亚硝酸检测中使用的较多。而采用传统的离子色谱法对利福喷丁及利福平中亚硝酸盐进行检测，由于利福喷丁和利福平极性较低，在离子色谱的淋洗液洗脱时容易析出并且较难从离子交换柱洗脱下来，从而缩短色谱柱使用寿命，降低灵敏度。而且，亚硝酸根在酸性条件下不稳定，因此也不能采用消解的方法去除基质的干扰。

发明内容

本发明提供了一种离子色谱法测定利福平或利福喷丁中亚硝酸根的方法。采用了柱切换基质消除法，建立了离子色谱测定利福平和利福喷丁中亚硝酸根离子的方法。

具体来说，本发明提供了如下技术方案：

一种离子色谱法测定利福平或利福喷丁中亚硝酸根的方法，包括以下步骤：

(1)样品的提取及净化：取利福平或利福喷丁胶囊内容物，经甲醇和去离子水组成的稀释液溶解后，采用RP固相萃取柱去除基质，收集第6mL续滤液作为供试品溶液，备用；

(2)配制对照品溶液：取空白样品稀释液，然后加入亚硝酸根标准溶液，配制成不同浓度的对照品溶液，备用；