[发明专利]一株高产戊二胺基因工程菌及构建方法与应用

权利要求书

1.一株高产戊二胺基因工程菌在发酵产戊二胺中的应用，其特征在于，在出发菌中过表达生物膜调控基因pgaABCD，所述生物膜调控基因pgaABCD的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，即得高产戊二胺大肠杆菌，其中，所述出发菌为高产赖氨酸菌株KACCPG，发酵的具体步骤为：

S1固定化载体制备

将固定化载体用0.5-2 M的NaOH浸泡30min-2h，用水冲洗至 pH为中性，再在0.5-2 MHCl中浸泡30min-2h，用水冲洗至pH为中性，烘干，得到经过预处理的固定化载体，最后将预处理大的固定化载体剪成大小相同，体积为0 .5cm³的正方体块状载体，其中，所述固定化载体选用的介质为聚氨酯材料；

S2发酵

在活化的高产戊二胺基因工程菌平板上，挑取单点，接种至含有对应抗性的种子培养基中；待种子培养基中的OD₆₀₀为1时，以 0.4％(v/v)的接种量接种到已灭过菌的含固定化载体的发酵培养基中，固定化发酵得到戊二胺。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述过表达生物膜调控基因pgaABCD通过向出发菌中导入过表达生物膜调控基因pgaABCD的质粒。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述过表达生物膜调控基因pgaABCD的质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤S1中NaOH的浓度为1M，浸泡1h，HCl的浓度为 1M，浸泡1h。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤S2中固定化载体的含量为2g/L发酵培养基，发酵的温度为30-37℃，发酵的时间为48-72h。