[发明专利]巴氏新小绥螨杀螨肽NbX-4及其应用

说明书

本发明公开了一种巴氏新小绥螨杀螨肽NbX‑4及其应用，该杀螨肽作为全新的杀螨基因资源，具有不同于已有杀螨剂的作用方式，对拓展具有生物活性的新型杀螨基因资源，降低现有化学杀螨剂广泛使用导致的各类安全风险，减少田间化学农药的用量具有重要的科学及现实意义。

技术领域

本发明属于基因工程和生物防治领域，具体涉及一种巴氏新小绥螨杀螨肽NbX-4及其应用。

背景技术

目前广泛用于农业害螨防治的手段是化学农药，尚无杀螨效果的蛋白类活性物质。但因为农业害螨世代周期短、繁殖力强、可孤雌生殖等特点，加之化学杀螨剂在田间的长期使用，导致以二斑叶螨为代表的农业害螨抗性问题突出，二斑叶螨甚至是抗性问题最为严重的节肢动物之一，仅次于小菜蛾(Van Leeuwen T et al.Population bulksegregant mapping uncovers resistance mutations and the mode of action of achitin synthesis inhibitor in arthropods.Proc Natl Acad Sci USA.2012；109:4407-4412.)。因此，开发高效环保的新型杀螨活性物质能够丰富农业害螨的防治手段，减少田间化学农药的用量。

作为节肢动物的天敌，蛛形纲捕食性生物体内大都具有天然杀虫(螨)活性肽(Spider toxin)，由于该类物质活性高，对非靶标生物安全，在新型杀虫活性物质的开发中受到广泛关注(King GF，et al.，Spider-Venom peptides：structure，pharmacology，andpotentialfor control of insect pests，Annu.Rev.Entomol.2013,58：475-496.)。目前发现的蜘蛛毒素的作用靶标大都在节肢动物神经系统细胞膜的多种通道和受体，如离子通道、神经配体门控通道和G蛋白关联受体等。然而当前关于蜘蛛毒素的研究主要集中在捕食性蜘蛛这类大型猎食者对昆虫的活性物质上，尚未关注蛛形纲中的微小天敌捕食螨体内的对农业害螨具有生物活性的物质。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为：如何提供一种具有杀螨效果的新型杀螨蛋白，该蛋白能够通过分子基因工程的方法大量表达或通过转基因技术在作物中表达，从而达到抗螨的效果。

本发明的技术方案为：巴氏新小绥螨杀螨肽NbX-4，它的氨基酸序列如SEQ IDNo.2所示。

巴氏新小绥螨杀螨肽NbX-4的基因，它的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

一种杀螨肽，为巴氏新小绥螨杀螨肽NbX-4的成熟肽，它的氨基酸序列如SEQ IDNo.3所示。

编码上述杀螨肽的基因。由于密码子的简并性，该编码基因可以有多种组合，优选地，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

一种表达载体，含有编码SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示的蛋白的基因。

SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示的多肽在朱砂叶螨防治中的应用。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明利用生物信息学分析方法，对巴氏新小绥螨全长转录组数据库中的基因进行筛选，与现有蜘蛛毒素相关基因进行序列比对，获得巴氏新小绥螨杀螨肽候选基因，然后利用多聚酶链式反应(PCR)及Sanger法测序，获得该基因的完整序列。将该基因的成熟肽区域构建到原核表达载体pET-32a(+)中，经原核系统表达，即可获得该基因编码的杀虫肽NbX-4。制备周期短，氨基酸序列小，适合体外大规模生产，同时，该杀螨肽作为全新的杀螨基因资源，具有不同于已有杀螨剂的作用方式，对拓展具有生物活性的新型杀螨基因资源，降低现有化学杀螨剂广泛使用导致的各类安全风险，减少田间化学农药的用量具有重要的科学及现实意义。

附图说明