[发明专利]一种诱导卵菌属隐袭腐霉菌产生游动孢子的方法

说明书

本发明属于诱导隐袭腐霉菌产孢技术领域，公开了一种诱导卵菌属隐袭腐霉菌产生游动孢子方法。本研究基于诱导液和草本植物榨取汁，将其对隐袭腐霉菌进行共同作用后具有明显诱导产生游动孢子的效果。由于卵菌属隐袭腐霉菌难以产生游动孢子，本发明发明了一种相较于已有的诱导产孢技术可以提高产孢量的方法，能够更高效诱导游动孢子的产生以及简化游动孢子的收集。

技术领域

本发明涉及卵菌诱导产生游动孢子的技术领域，更具体地，涉及一种诱导隐袭腐霉菌产生游动孢子的方法。

背景技术

隐袭腐霉菌Pythium insidiosum是一种类似真菌的水生卵菌，是哺乳动物中唯一能引起隐袭腐霉病的病原体。在沼泽地区具有生态优势，常见于热带、亚热带和温带地区。隐袭腐霉菌属于管毛生物界(Straminipila)(藻物界为其同物异名)，卵菌门Oomycota，卵菌纲Oomycetes，霜霉目Peronosporales，腐霉科Pythiaceae，腐霉属Pythium。腐霉属是一种生态上通用的微生物，在几乎所有的土壤和潮湿环境中都能找到。它们是最具破坏性的植物病原体之一，给多种作物造成经济损失。腐霉属的成员在生态学和生理学上都是独一无二的。它们经常栖息在世界各地的土壤和水域。然而，在该属中所描述的所有微生物中，只有一种，隐袭腐霉菌被认为是哺乳动物中引起疾病的唯一病原体。

该生物通常以两种形式出现:一种是具有直角分枝或宽丝的菌丝，另一种是带有双鞭毛的水生游动孢子，是仅存在于水生环境中的感染性繁殖体。由病原性卵菌产生的有性生殖形式是一种球形、厚壁结构，可以承受不利的外部条件。卵孢子可以在土壤中存活很长一段时间(几个月到几年)，这使病原体在环境中的存在永久化，增加了感染宿主的机会。游动孢子是P.insidiosum的感染单位，能游动以发芽菌丝形式侵入宿主组织。菌丝在实验室培养中很常见，而游动孢子由于其产生条件苛刻因此在实验室培养中很少见。

为了更好鉴别菌株以及研究隐袭腐霉菌的生物学特性，诱导隐袭腐霉菌产生游动孢子是研究中必不可少的一步。但是目前报道的诱导隐袭腐霉菌产孢的方法仍然较少，不仅产孢量较少且分离困难，亟需一种新的诱导隐袭腐霉菌产生游动孢子的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中存在的上述缺陷，提供一种诱导隐袭腐霉菌产生游动孢子的方法，该方法具有能够提供简化产孢步骤和明显提高产孢量的优势。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种复合诱导液，由隐袭腐霉菌孢子诱导液和草本植物汁液组成；

所述隐袭腐霉菌孢子诱导液包括如下组分：

A液：K₂HPO₄·3H₂O 11.4g；KH₂PO₄ 6.8g,(NH₄)₂HPO₄ 6.6g；超纯水50ml；

B液：MgCI₂·6H₂O 2.54g,CaCl₂·2H₂0 1.84g；超纯水25ml；

A液和B液的混合体积比为5:1-1:1。草本植物汁液中草本植物为番荔枝叶。

作为一种优选的技术方案，所述番荔枝叶与水的混合体积比为1:1-1:5。

作为一种优选的技术方案，将A液和B液混合，再加入1L水中，得到隐袭腐霉菌孢子诱导液。

作为一种优选的技术方案，隐袭腐霉菌孢子诱导液和草本植物汁液的混合体积比为7～1：1。

本申请同时保护所述复合诱导液在诱导隐袭腐霉菌产生游动孢子中的应用。

与现有产孢技术相比，本发明具有以下有益效果：