[发明专利]一种耐高温、高产酸性蛋白酶的白曲霉及其在固态发酵中的应用

权利要求书

1.一种耐高温、高产酸性蛋白酶的曲霉，其特征在于：

所述曲霉 M047（Aspergillus sp. M047）是从大曲中分离纯化所得，于2022年1月10日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC NO：M 2022054。

2.根据权利要求1所述的曲霉，其特征在于：

所述曲霉初期呈白色，圆形，向四周扩散，老化后呈乳黄色；生长温度28~44℃，生长pH4.5~7.5。

3.一种权利要求1或2所述的曲霉的应用，其特征在于：

以所述曲霉制备固态菌制剂并用于固态发酵过程，能够增加固态发酵中蛋白的利用率，并提高酒体香味成分的含量。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：

所述曲霉在制备成固态菌制剂之前，需将斜面菌种进行活化，然后培养成一级液体菌种；一级液体菌种经过二级种子培养后，接种到装填有经过灭菌的固体培养基的小型自动化种曲机中进行扩大培养制备成三级种子；最后利用大型自动化制曲机按照一定的比例将三级种子接种于固体培养基上培养制备获得固态菌制剂。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于包括如下步骤：

步骤1：菌种的活化

斜面菌种：将曲霉接种于麦芽汁固体斜面上，在28~40℃条件下培养36~60小时，然后放入4℃冰箱保存；

菌种活化：将斜面曲霉菌种点接于麦芽汁固体平板上，在28~40℃条件下平板倒置培养36~60小时；

步骤2：一级液体菌种的制备

经步骤1活化后，接种一环菌丝体于装有100mL高粱液体培养基的三角瓶中，于28~40℃条件下振荡培养36~60小时，即获得曲霉一级液体菌种；

步骤3：二级液体菌种的制备

将曲霉一级液体菌种接种于装有10~20L高粱液体培养基的发酵罐中，接种浓度为0.5~1.5%w/w，培养条件为28~40℃，pH值为4.5~6.0，培养36~48小时，制成二级液体菌种；

步骤4：固态菌制剂制备

4a、将二级液体菌种按照1.5~2.5%的接种量接种到装填有经过灭菌的固体培养基的小型自动化种曲机中进行扩大培养，培养条件：培养温度28~40℃、培养时间36~48h、培养湿度85~95%，制备成三级固体菌种；

4b、将三级固体菌种按照0.5~1.0%的接种量接种到装填有经过灭菌的固体培养基的大型自动化制曲机中进行培养，培养条件：培养温度28~44℃、培养时间36~48h，培养湿度85~95%，制备成固态菌制剂；

步骤5：固态发酵

将固态菌制剂按照5~10%的接种量加入常规固态发酵体系中，能够提高原料中的蛋白质的利用率，提高酒体香味成分含量。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：

步骤1中，所述麦芽汁固体斜面的配制方法如下：取麦芽浸粉130.0g、琼脂15.0g、氯霉素0.1g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，pH值6.0±0.2 25℃，分装试管，试管口使用封口膜密封，121℃高压灭菌15分钟，无菌环境下倾斜10~15°放置冷却即得。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：

步骤1中，所述麦芽汁固体平板的配制方法如下：取麦芽浸粉130.0g、琼脂15.0g、氯霉素0.1g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，pH值6.0±0.2 25℃，装于三角瓶内，瓶口使用封口膜密封，121℃高压灭菌15分钟，无菌环境下冷却至45℃，倾倒于无菌的平板中，每个平板25mL，放置冷却即得。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：

步骤2中，所述高粱液体培养基的配制方法如下：取高粱粉一份，加水四份蒸煮0.5~1小时，按使用说明加入淀粉酶液化，液化后补加55~75℃温水一份，搅拌均匀，在55~75℃糖化0.5~1小时，用稀碘液试纸不显蓝色，用细白布过滤，测量溶液的糖度并调整为8~10°波美度后使用。