[发明专利]一种猪链球菌三组分亚单位疫苗其制备方法

说明书

本发明公开了一种猪链球菌三组分亚单位疫苗其制备方法，该疫苗含抗原HP0526、抗原HP1130、抗原HP0918和佐剂，抗原HP0526的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，抗原HP1130的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，抗原HP0918的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示。该疫苗的制备方法为：利用基因克隆、蛋白表达和纯化技术获得抗原HP0526、抗原HP1130、抗原HP0918，将抗原HP0526、抗原HP1130、抗原HP0918与佐剂混合，制备猪链球菌三组分亚单位疫苗。该三组分亚单位疫苗可用于保护猪对抗猪链球菌血清2、3、7和9型的感染，且比市售猪链球菌亚单位疫苗和灭活疫苗的效果更佳。

技术领域

本发明涉及生物疫苗技术领域，具体涉及一种猪链球菌三组分亚单位疫苗其制备方法。

背景技术

猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一种人畜共患病原菌，部分高致病性菌株不仅引起猪的脑膜炎、关节炎、败血症、肺炎或急性死亡等，且危害与养殖业密切相关的人群健康，引起人类脑膜炎、肺炎、感染性休克和死亡。根据菌体荚膜多糖抗原性的区别，猪链球菌可分为35种血清型(1～34型和1/2型)，其中血清2型在猪群和患病人群中的分离率最高，血清9、3和7型分离率次之。

疫苗是动物疫病防控的重要且有效的手段之一，目前猪链球菌疫苗主要分为灭活疫苗、弱毒活疫苗和亚单位疫苗。灭活苗制作周期短、使用安全、易于存放，但接种后不能在体内繁殖，因此所需接种剂量大、免疫周期短，需要加入佐剂增强其免疫效果；弱毒苗虽然毒力致弱，但仍能在体内繁殖且运输、储存都不方便、研究周期长，存在毒力返强的风险；此外，由于猪链球菌血清型众多，灭活疫苗和弱毒活疫苗对多个血清型的保护能力有限，使得保护效果不理想。相比于传统疫苗，基因工程亚单位疫苗主要是利用病原的免疫保护成分，能够有效地避免由于灭活苗或弱毒苗所导致的热原副反应发生，而且机体只产生针对基因工程亚单位疫苗所使用的抗原的高水平特异性抗体，安全性相对较高。因此，细菌的基因工程亚单位疫苗逐渐成为了研究热点。

发明内容

基于上述现有技术，本发明提供了一种猪链球菌三组分亚单位疫苗其制备方法，可用于保护猪对抗猪链球菌血清2、3、7和9型的感染。

实现本发明上述目的所采用的技术方案为：

一种猪链球菌三组分亚单位疫苗，其特征在于：该三组分亚单位疫苗含抗原HP0526、抗原HP1130、抗原HP0918和佐剂，抗原HP0526的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，抗原HP1130的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，抗原HP0918的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

进一步，所述的佐剂为IMS 1313VGN佐剂。

进一步，所述的抗原HP0526、抗原HP1130、抗原HP0918三种抗原混合后与佐剂按质量比为1：1混合。

一种猪链球菌三组分亚单位疫苗的制备方法，包括如下步骤：

步骤1、以保藏号为CCTCC NO：M2011282的猪链球菌血清2型SS2LT菌株基因为模板，利用SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8和SEQ IDNO.9所示的引物对分别对HP0526、HP1130、HP0918基因进行PCR扩增，得到HP0526基因目的片段、HP1130基因目的片段和HP0918基因目的片段；

步骤2、将pET28a载体用BamHI+XhoI或EcoRI+HindIII进行双酶切，得到表达载体；

步骤3、将表达载体分别与HP0526基因目的片段、HP1130基因目的片段、HP0918基因目的片段进行同源重组，分别获得三种重组表达载体；