[发明专利]普氏野马微卫星位点组合及其引物和应用在审
| 申请号： | 202210667781.4 | 申请日： | 2022-06-14 |
| 公开（公告）号： | CN115044681A | 公开（公告）日： | 2022-09-13 |
| 发明（设计）人： | 师玮;恩特马汗·阿站汗;张丽娇;徐文轩;汪沐阳;张赫凡;杨维康 | 申请（专利权）人： | 中国科学院新疆生态与地理研究所;新疆维吾尔自治区野马繁殖研究中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京东方盛凡知识产权代理事务所(普通合伙) 11562 | 代理人： | 菅士腾 |
| 地址： | 830000 新疆维吾*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 野马 卫星 组合 及其 引物 应用 | ||
1.普氏野马微卫星位点组合，其特征在于，包括16个微卫星位点，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.33-48所示。
2.用于扩增如权利要求1所述的普氏野马微卫星位点组合的引物组，其特征在于，所述引物组包括如SEQ ID NO.1-32所示的核苷酸序列。
3.一种普氏野马微卫星试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述引物组。
4.一种普氏野马微卫星位点的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、提取普氏野马基因组DNA；
S2、对SEQ ID NO.1-32所示的引物组进行荧光引物合成，获得荧光标记的普氏野马微卫星引物组；
S3、以S1中的普氏野马基因组DNA为模板，利用S2中荧光标记的普氏野马微卫星引物组进行PCR扩增，获得扩增产物；
S4、对S3中的PCR扩增产物进行凝胶电泳和毛细管电泳分型检测；
S5、对S4中检测的结果进行微卫星位点多态性评估。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，在步骤S2中，所述荧光标记的普氏野马微卫星引物组是通过对SEQ ID NO.1-32所示的引物组的单侧引物5’端标记FAM获得的。
6.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，在步骤S1中，所述普氏野马基因组DNA为粪便中提取的DNA。
7.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，在步骤S3中，所述PCR的扩增程序为：94℃预变性2-5min，94℃变性30s，50℃-60℃退火30s，72℃延伸90s，共30个循环，最后72℃修复延伸5-10min。
8.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，在步骤S3中，所述PCR的扩增体系为：模板DNA 1μL，10μM的正反引物各1μL，2×Easy TaqR PCR SuperMix 12.5μL，Nuclease-free Water 9.5μL。
9.一种权利要求1所述普氏野马微卫星位点组合或权利要求2所述引物组或权利要求3所述普氏野马微卫星试剂盒在普氏野马种群分析中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述普氏野马种群分析包括普氏野马遗传多样性、种群遗传结构、谱系地理或亲权鉴定。
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