[发明专利]一种肺炎支原体核酸检测试剂盒及其应用

说明书

本发明属于肺炎支原体检测技术领域，具体涉及一种肺炎支原体核酸检测试剂盒及其应用。本申请公开的一种肺炎支原体核酸检测试剂盒MP探针溶液、MP荧光标记物质、MP核酸释放液、MP检测卡；所述MP探针溶液包括MP探针1和MP探针2，具体的使用方法包括以下步骤：S1.将试剂盒各组分拿出来，检查是否完好无损；S2.将适量样本10μL，5μLMP探针溶液，5μLMP荧光标记物质，50μLMP核酸释放液均加入到0.5mL的离心管中，进行混匀；S3.将反应管放入孵育区；S4.放入荧光分析仪中进行结果读取；S5.5分钟后自动检测并显示判读结果。本发明所述的试剂盒，相比一般的荧光PCR和测序检测，信号强度更强，特异性更好，灵敏度和PCR一致。

技术领域

本发明属于肺炎支原体检测技术领域，具体涉及一种肺炎支原体核酸检测试剂盒及其应用。

背景技术

肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)主要通过呼吸道传播，一年四季均可发病，以夏秋季为主。每年均会小流行，2-6年出现大流行。肺炎导致死亡的病例约占5岁以下小儿死亡总数的20％。MP占各类肺炎总数的8.5％-27.9％。

MP感染在小儿呼吸道感染中达30％以上。现有的检测技术，主要通过核酸扩增(荧光PCR法)的原理进行核酸提取纯化，需要的时间为1-3小时，且实用环境需要满足：需三间专业PCR实验室、需大型中心实验室；若污染，长期无法使用，还需要专门经过培训的技术人员来进行操作；一般情况下，只有大型三甲医院中心实验室才满足该条件；

而且，现有的检测方法，还容易造成核酸扩增，容易引起实验室阳性产物污染、且污染长期无法消除的风险，核酸扩增(荧光PCR法)需要-20℃储存，不易运输和储存

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的核酸扩增，容易引起实验室阳性产物污染、且污染长期无法消除，不容易运输和储存，且使用环境要求高的技术问题，提供一种肺炎支原体核酸检测试剂盒及其应用。

为了实现本发明的上述目的，本发明采用以下技术方案，

一种肺炎支原体核酸检测试剂盒，包括：

MP探针溶液、MP荧光标记物质、MP核酸释放液、MP检测卡；

所述MP探针溶液包括MP探针1和MP探针2；

所述MP探针1的DNA序列为：

GGGGTAACGGCCTACCAAGGCAATGACGTGTAGCTATGCT

所述MP探针2的DNA序列为：

CGTAGATATATGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGAAAAC

进一步的，所述MP探针溶液还包括5％-8％的RNAlater、200/mL-500/mL的Rnsin；

在本发明中，MP探针1、MP探针2和肺炎支原体16S RNA靶核酸进行结合。

RNAlater和Rnasin通过抑制环境溶液中RNA酶，稳定核酸结构，可以起到常温存放RNA核酸探针的作用。

进一步的，所述MP荧光标记物质为包括.02mg/mL-0.08mg/mL的DNA-RNA抗体、0.2ug/mL-0.9ug/mL的荧光微球；