[发明专利]一种应用查尔酮还原酶合成二氢查尔酮的方法

权利要求书

1.一种应用查尔酮还原酶合成二氢查尔酮的方法，其特征在于，以查尔酮为底物，经酶催化体系催化获得相应的二氢查尔酮，所述酶催化体系由查尔酮还原酶和辅因子再生系统组成。

2.根据权利要求1所述的一种应用查尔酮还原酶合成二氢查尔酮的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：以查尔酮为原料，以NADPH为辅因子，在酶催化体系中的查尔酮还原酶的选择性还原催化下，还原其碳碳双键生成相应的二氢查尔酮，反应式：

在反应过程中NADPH被氧化成NADP⁺，通过辅因子再生系统将NADP⁺再生为NADPH。

3.根据权利要求1或2所述的一种应用查尔酮还原酶合成二氢查尔酮的方法，其特征在于，查尔酮还原酶来源于植物紫花苜蓿(Medicago sativa)，编码查尔酮还原酶的核苷酸序列如SEQ.No.1所示，其氨基酸序列如SEQ.No.2所示。

4.根据权利要求1或2所述的一种应用查尔酮还原酶合成二氢查尔酮的方法，其特征在于，所述辅因子再生系统为：以葡萄糖脱氢酶为辅因子再生酶、以葡萄糖为辅因子再生底物、并包含NADP⁺。在NADP⁺的存在下，葡萄糖脱氢酶将葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并生成NADPH，而生成的NADPH作为辅因子，参与查尔酮还原酶催化查尔酮双键还原的反应，生成二氢查尔酮和NADP⁺，而NADP⁺进一步参与葡萄糖氧化反应，进一步循环获得NADPH，反应式如下：

5.根据权利要求1或2所述的一种应用查尔酮还原酶合成二氢查尔酮的方法，其特征在于，所述酶催化体系包括查尔酮还原酶、葡萄糖脱氢酶、葡萄糖和微量NADP⁺，所述酶催化体系中查尔酮还原酶和辅因子再生酶均纯化后为游离纯酶。

6.根据权利要求5所述的一种应用查尔酮还原酶合成二氢查尔酮的方法，其特征在于，所述葡萄糖脱氢酶来源于巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)IAM1030的葡萄糖脱氢酶。

7.根据权利要求1或2所述的一种应用查尔酮还原酶合成二氢查尔酮的方法，其特征在于，酶催化体系中，所述查尔酮还原酶和葡萄糖脱氢酶的添加量均为0.1～5mg/ml。

8.根据权利要求1或2所述的一种应用查尔酮还原酶合成二氢查尔酮的方法，其特征在于，酶催化体系中，底物潜手性酮的添加量为0.1～15mM；辅因子再生底物的添加量为0.15～20mM，反应温度为20～45℃，反应时间为0.5～24h。

9.根据权利要求1或2所述的一种应用查尔酮还原酶合成二氢查尔酮的方法，其特征在于，控制反应的pH值为6～9。