[发明专利]利用水角叶片为外植体的胚性愈伤组织诱导及植株再生和快繁的方法

权利要求书

1.一种利用不定芽增殖培养提高离体水角组培效率的方法，其特征在于以下步骤：

(1)外植体的选取与消毒

于连续2个晴朗的天气取野外水角的幼嫩叶片，用自来水冲洗30分钟，滤纸吸干，再用70％酒精消毒20秒，再用有效氯≥40g/L的漂白水消毒5分钟，无菌水冲洗5遍，无菌滤纸吸干；

(2)胚性愈伤组织的诱导

将消毒好的水角叶片切成0.5厘米×0.5厘米方块，接种至胚性愈伤组织诱导培养基中，在黑暗条件下培养30天后，培养温度为25℃±2℃；从水角叶片中诱导出胚性愈伤组织；

(3)不定芽的诱导

将步骤(2)获得的胚性愈伤组织接到于不定芽诱导培养基中，在光照条件下培养30天后，使胚性愈伤组织分化出不定芽；培养温度为25℃±2℃；光照强度为2000lx；光周期为16h光照/8h黑暗；

(4)不定芽的增殖培养

将步骤(3)的不定芽连同愈伤组织块一起转移至新的不定芽诱导培养基中，在光照条件下培养15天后，使之形成丛生芽；将水角丛生芽切割成含3-5个不定芽的小块，接种至不定芽增殖培养基中，在光照条件下培养15天后，得到增殖的不定芽；培养温度为25℃±2℃；光照强度为2000lx；光周期为16h光照/8h黑暗；

(5)不定芽的生根培养

将步骤(4)所得的健壮不定芽切下，接种至生根培养基中培养培养25-30天，培养温度为25℃±2℃；光照强度为2000lx；光周期为16h光照/8h黑暗；

其中：

上述培养基成分及其配比如下：

叶片胚性愈伤组织诱导培养基：MS+NAA2mg/L+6-BA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8-6.2；

不定芽诱导培养基：MS+6-BA 5mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8-6.2；

不定芽增殖培养基：MS+6-BA 3mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8-6.2；

生根培养基：MS+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8-6.2。

2.专用于不定芽增殖培养提高离体水角组培效率方法的培养基，其征在于，所述培养基的成分及配比为：

叶片胚性愈伤组织诱导培养基：MS+NAA 2mg/L+6-BA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8-6.2；

不定芽诱导培养基：MS+6-BA 5mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8-6.2；

不定芽增殖培养基：MS+6-BA3mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8-6.2；

生根培养基：MS+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8-6.2。