[发明专利]一种HPV病毒检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种HPV病毒检测试剂盒。本发明通过筛选优化获得了HPV6/11特异性的免疫抗原肽，将所述抗原肽免疫小鼠制备获得了特异性的单克隆抗体，所述单克隆抗体能够特异性的结合HPV6/11，并且还具有抑制HPV6/11感染正常细胞的效果，将所述单抗制备成为试剂盒可以有效的用于HPV的检测，具有较好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，更具体的涉及一种HPV病毒检测试剂盒。

背景技术

宫颈癌是全球范围内女性第二大常见的恶性肿瘤，每年约有52.8万新发病例和27.5万死亡病例，其中，87％的新发病例发生在发展中国家。中国每年约有9.9万新发病例和3.1万死亡病例。大量研究表明，人乳头瘤病毒(hu-manpapillomavirus，HPV)的持续感染与宫颈癌的发生密切相关，高危型HPV感染是引起宫颈上皮内瘤变(cervicalintraepithelialneoplasia，CIN)和子宫颈癌的主要因素。目前已发现200多种HPV基因型别，其中，约54种HPV基因型别可感染生殖道黏膜，并且还有更多的HPV亚型正在鉴定中。新的HPV基因型的判定标准是指该HPV基因型别在E6、E7或者L1区的核苷酸序列与其他任意已确定型别的HPV有超过10％的不同。根据其致病力及致病危险性的大小可将其分为高危型HPV和低危型HPV。高危型HPV感染可引起宫颈、阴道、肛门、阴茎和口咽部位的上皮内瘤变或癌变，其HPV型别主要包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82。低危型HPV感染仅可引起生殖器疣等良性病变，其HPV型别主要包括6、11、40、42、43、44、54、61、70、72和81。与高危型HPV相比，低危型HPV的E6和E7蛋白干扰P53基因和pRb基因的作用相对较弱。

HPV检测技术广泛应用于宫颈癌的筛查、流行病学调查及宫颈癌疫苗有效性的评价中。目前，国内外针对HPV的检测方法层出不穷，HPV不同检测方法的优劣主要通过两个方面进行评价：临床使用价值(即临床灵敏度)与检测极限(即分析灵敏度)。临床灵敏度(又称功能灵敏度)是指在HPV检测技术中试验结果为阳性的患者所占的比例以及HPV对CIN2级及以上2的检出能力；分析灵敏度(又称检测限量)是指可检测的最低分析物浓度。良好的HPV检测技术需要满足较高的临床灵敏度及较低的分析灵敏度。目前，全世界约完成150个不同的HPV检测实验，尚有一部分仍在进行中。已采用的检测方法主要包括DNA检测、RNA检测和与HPV相关的标志物检测以及抗原检测。

Aptima HPV于2012年获批，其是第一个也是唯一一个经过FDA认证的用于HPVmRNA检测技术。该技术基于转录介导的扩增(transcription—MediatedAmplification，TMA)技术检测HPV E6/E7mRNA：即在上游引物5’端添加T7启动子，在反应体系中引入RNA聚合酶，目的mRNA经过逆转录成cDNA后，以转录的方式实现目的分子扩增。该技术目的在于检测HPV致癌基因E6/E7的mRNA，较之于HPV—DNA检测而言，可以有效避免HPV一过性感染对检测结果的干扰，但AptimaHPV检测费用也较昂贵。

HPV抗体血清学检测在HPV疫苗学和流行病学研究中具有重要意义。目前针对HPV的快速免疫检测试剂盒的研究还不够多，有待于进一步的研究，特别是能同时针对多种HPV亚型的检测试剂还不够多。因此，开发针对HPV多亚型检测的试剂盒变得尤为迫切。

发明内容

本发明克服现有技术的缺陷，筛选并获得了HPV6和HPV11高免疫原性抗原肽，其序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明另外一方面，以HPV6和HPV11高免疫原性抗原肽作为免疫原制备并获得了相应的单克隆抗体。

一方面，本发明提供了特异性针对HPV6/11的单克隆抗体，其特征在于其轻重链可变区序列分别如SEQ ID No：3和4所示。