[发明专利]用于构建贝氏柯克斯体可诱导型CRISPRi系统的DNA分子及应用有效
| 申请号： | 202210699871.1 | 申请日： | 2022-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN114774454B | 公开（公告）日： | 2022-10-21 |
| 发明（设计）人： | 熊小路;焦俊;张家宁;付梦姣;欧阳譞;于永慧;赵明亮;张珊;周春雨 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N15/85;C12N15/113;C12N15/55;C12N15/66;C12N1/21;C12N5/10;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 朱翠玲 |
| 地址： | 100071*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 构建 贝氏柯克斯体可 诱导 crispri 系统 dna 分子 应用 | ||
1.一种重组载体，所述重组载体含有一种DNA分子，所述DNA分子自上游至下游依次包括：启动子、sgRNA基因、Tet阻遏蛋白的反义基因、Tet操纵子、dCas9基因、所述启动子的反向启动子，所述反向启动子是核苷酸序列与所述启动子的核苷酸序列反向互补的启动子；
所述启动子的核苷酸序列为SEQ ID No.3第7-201位；
所述dCas9的编码序列为SEQ ID No.1第25-4131位；
所述重组载体的骨架载体为pJB-Kan-P1169-3xFLAG。
2.权利要求1所述重组载体的应用，其特征在于：所述应用为A1)、A2)或A3)
A1)、权利要求1所述的重组载体在研究贝氏柯克斯体特定基因的生物学功能中的应用；
A2)、权利要求1所述的重组载体在研究贝氏柯克斯体特定基因的毒力表型中的应用；
A3)、权利要求1所述的重组载体在贝氏柯克斯体遗传转化中的应用。
3.抑制贝氏柯克斯体的靶基因表达的方法，其特征在于：所述方法包括将权利要求1所述的重组载体导入贝氏柯克斯体，抑制贝氏柯克斯体的靶基因表达，所述重组载体中，所述sgRNA的靶标基因是所述靶基因。
4.制备重组贝氏柯克斯体的方法，其特征在于：所述方法包括将含有权利要求1所述的重组载体导入贝氏柯克斯体，得到重组贝氏柯克斯体，所述重组贝氏柯克斯体在脱水四环素存在的条件下在宿主细胞内繁殖能力低于所述贝氏柯克斯体；所述重组载体中，所述sgRNA的靶标基因是dotB基因。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述宿主细胞为动物细胞。
6.由权利要求4或5所述方法制备的重组贝氏柯克斯体。
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