[发明专利]用于蛋白质双向电泳中等电聚焦质控的荧光多肽及其制备方法

说明书

本发明提供了用于等电聚焦质控的内参多肽。所述多肽是如式(1)所示的多肽：F‑L‑aa₁‑aa₂‑aa₃‑aa₄‑aa₅‑aa₆‑aa₇‑aa₈(1)；或者式(1)所示多肽的具有相同功能的多肽衍生物。本发明的内参多肽的分子量低、用量少，能够保证双向电泳数据结果的重复性。

技术领域

本发明属于检测领域。更具体地，本发明涉及应用于蛋白质双向电泳中等电聚焦质控的荧光多肽及其制备方法。

背景技术

1975年，意大利生化学家O'Farrell发明双向电泳技术，主要是利用蛋白质的带电性和分子量大小的差异，通过等电聚焦电泳和SDS-PAGE电泳达到分离蛋白质组的技术。该技术中的等电聚焦电泳主要依据蛋白质或其它两性分子等电点的不同，在一个稳定的、连续的pH梯度中进行分离和分析。

等电聚焦电泳基本原理可分为两个部分，第一步构建电场，在一电解池中加入载体两性电解质，当通过直流电时，载体就根据各自等电点的不同而移动，并逐渐形成一个由阳极到阴极pH值逐渐增加的pH梯度。第二步分离蛋白质：由于蛋白质分子所带电荷量都取决于所处环境的pH值，在环境的pH值高于其pI值处带负电，反之则带正电，带正负电荷的蛋白分别向其等电点处泳动，直至其等电点处电荷消失而停止，达到平衡，等电点相近的蛋白聚集，形成一个很窄的区带，使不同等电点的样品相互分离。

等电聚焦电泳具有分辨率高(0.01pH单位)、抵消扩散的作用、浓缩低浓度样本等优点，不仅可以用来分离两性大分子，还可以通过测定等电点来鉴定蛋白质。

目前，在双向电泳的研究中，聚焦时间与胶条的长度、两性电解载体、样品基质中的离子浓度、IPG胶条水化状态、胶条泡涨等因素均会影响样品等电聚焦结果。而对于聚焦结果的检测，一般通过第二向电泳结束，SDS-PAGE胶染色后获知。虽然可以在等电聚焦的过程中对电流进行监测，但无法直接验证样品中蛋白的聚焦完全度。与此同时，即使通过对胶条进行银染或考马斯染色等方式进行结果的验证，但胶条无法继续进行第二向SDS-PAGE电泳。而市面上的等电聚焦标准品，往往用蛋白质分子，存在分子量大，使用时需要单独进行电泳的缺陷，无法做为真正的内参。如果与样品一起进行电泳，则会残留于SDS-PAGE胶中，对结果存在一定干扰。

因此，本领域急需一种能够与样品一起进行电泳，从而能够真正作为等电聚焦电泳的内参的标准品。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于等电聚焦质控的内参多肽，所述内参多肽的分子量足够小，从而能够与样品一起进行电泳，同时不影响样品的等电聚焦，进而保证了双向电泳数据结果的重复性。

在第一方面，本发明提供一种用于等电聚焦质控的内参多肽，所述多肽是：

1)如下式(1)所示的多肽：

F-L-aa₁-aa₂-aa₃-aa₄-aa₅-aa₆-aa₇-aa₈(1)

式(1)中，

F为荧光基团；

L为任选的连接分子；

aa₁独立选自：E、K、D、R、Q、N；

aa₂独立选自：E、D；

aa₃独立选自：I、K、L、V、M、A、F、R、Q、N；

aa₄独立选自：R、K、Q、N、R、N；