[发明专利]水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体，其特征在于，所述碱性蛋白酶2709突变体的疏水性参数△G′值，即乙醇和水之间自由能变化比原地衣芽孢杆菌蛋白酶2709亲本序列氨基酸增加1kJ/mol及以上，所述碱性蛋白酶2709突变体至少包含有以下位置的疏水性氨基酸修饰中的一个：25、43、57、61、76、96、116、122、127、140、154、160、162、182、184、211、217、239、247、268，其中所述位置对应于氨基酸序列SEQ ID NO：1的位置。

2.根据权利要求1所述的水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体，其特征在于，所述碱性蛋白酶2709突变体包含以下氨基酸修饰置换中的一种或三种或六种：第61位氨基酸残基突变为丝氨酸、第96位氨基酸残基突变为丙氨酸、第116位氨基酸残基突变为丙氨酸、第122位氨基酸残基突变为酪氨酸、第140位氨基酸残基突变为色氨酸、第160位氨基酸残基突变为丝氨酸、第162位氨基酸残基突变为丝氨酸、第182位氨基酸残基突变为丝氨酸、第211位氨基酸残基突变为丝氨酸、第217位氨基酸残基突变为丙氨酸、第217位氨基酸残基突变为丝氨酸、第247位氨基酸残基突变为丙氨酸，其中所述位置对应于氨基酸序列SEQ ID NO：1的位置。

3.根据权利要求2所述的水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体，其特征在于，所述碱性蛋白酶2709突变体为将第116位氨基酸残基突变为丙氨酸、第140位氨基酸残基突变为丙氨酸、第247位氨基酸残基突变为丙氨酸，其中所述位置对应于氨基酸序列SEQ ID NO：1的位置。

4.根据权利要求2所述的水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体，其特征在于，所述碱性蛋白酶2709突变体为将第96位氨基酸残基突变为丙氨酸、第122位氨基酸残基突变为丙氨酸、第217位氨基酸残基突变为丝氨酸，其中所述位置对应于氨基酸序列SEQ ID NO：1的位置。

5.根据权利要求2所述的水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体，其特征在于，所述碱性蛋白酶2709突变体为将第96位氨基酸残基突变为丙氨酸、第116位氨基酸残基突变为丙氨酸、第122位氨基酸残基突变为丙氨酸、第140位氨基酸残基突变为丙氨酸、第217位氨基酸残基突变为丝氨酸、第247位氨基酸残基突变为丙氨酸，其中所述位置对应于氨基酸序列SEQ ID NO：1的位置。

6.根据权利要求1所述的水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体，其特征在于：所述碱性蛋白酶2709突变体的亲本蛋白为地衣芽孢杆菌的2709碱性蛋白酶。

7.一种权利要求1～6任一项所述的水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体的制备方法，其特征在于：对来源于地衣芽孢杆菌的2709碱性蛋白酶结构进行计算机模拟，通过分子动力学计算，以减少蛋白酶发生脱酰胺反应的几率为基准，寻找2709碱性蛋白酶分子中对水溶液稳定性贡献最大的氨基酸残基位点进行蛋白质工程改造，获得比原地衣芽孢杆菌2709碱性蛋白酶亲本序列氨基酸的疏水性参数△G′值，即乙醇和水之间自由能变化增加大于等于1kJ/mol的突变体，再通过分子动力学方法研究和评估碱性蛋白酶2709突变体在水溶液中稳定性的影响，最终得到具有较高水溶液稳定性能的碱性蛋白酶2709突变体。

8.一种权利要求1～6任一项所述水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体的应用，其特征在于：用于洗涤剂或清洁剂中。

9.一种洗涤剂组合物，其特征在于：含有权利要求1～6中任一项所述的水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体。

10.一种重组宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞为含有权利要求1～6任一项所述的水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体的地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌。