[发明专利]石蒜碱在防治SVCV感染中的应用

说明书

本发明公开了石蒜碱在防治鲤春病毒血症病毒（Spring viraemia of carp virus，SVCV）感染中的应用，细胞感染模型的建立显示，石蒜碱能够对SVCV感染细胞起到显著的保护作用，结合qPCR实验结果发现石蒜碱处理后SVCV相关基因转录水平被显著抑制，Western Blot实验结果显示石蒜碱处理后SVCV病毒在蛋白水平被清除。因此，石蒜碱能够作为防治SVCV感染的药物或添加剂，并具有使用剂量小，保护效果佳的优点。

技术领域

本发明属于水产养殖技术领域，涉及石蒜碱的新用途，具体涉及石蒜碱用于制备预防或治疗SVCV病毒感染的药物或添加剂。

背景技术

石蒜碱(Lycorine hydrochloride)是一种存在于石蒜科植物石蒜的鳞茎内的环形生物碱，是石蒜提取物中主要活性物质。近期的研究表明，石蒜碱的药理活性包括抗肿瘤作用，抗炎作用，调控脂质合成作用等。在抗肿瘤活性方面，石蒜碱通过抑制肿瘤转移的重要调节因子表达，失活机体自噬信号通路，促进肿瘤细胞凋亡等方式防止肿瘤扩散。在抗炎作用方面，石蒜碱被发现对于细菌脂多糖引起的炎症反应具有良好的抑制效果，主要通过抑制微管相关蛋白1A/1B轻链 3B(LC3Ⅱ)的酯化形式形成并增加螯合体蛋白(p62)的表达，从而抑制脂多糖诱导的机体自噬。在调控脂质合成作用方面，石蒜碱能够促进调控脂质生物合成的重要转录因子固醇调节原件结合蛋白(SREBPs)降解，进而改善高脂饮食引发的肥胖、高血脂和胰岛素抵抗。此外，石蒜碱被发现能够在体内、体外有效改善心脏纤维化，或对心血管疾病治疗具有重要意义。目前，石蒜碱针对水生病毒的作用尚不清楚，尚未有将石蒜碱应用于防治水生动物病毒病的实例。

鲤春病毒血症病毒(Spring viraemia of carp virus，SVCV)属弹状病毒科(Rhabdoviridae)，水疱病毒属(Vesiculovirus)，是一种单股负义链RNA病毒。 SVCV引起的鲤春病毒血症(SVC)是一种具高传染性、高致死性的水产疾病，能够造成鲤科鱼类大量死亡，形成巨大的经济损失。SVCV基因组主要编码5种结构蛋白，分别为核蛋白(Nucleoprotein，N)、磷蛋白(Phosphoprotein，P)、基质蛋白(Matrix protein，M)、糖蛋白(Glycoprotein，G)和RNA聚合酶蛋白 (RNA polymerase，L)。目前，SVCV的结构及遗传多样性已有较多研究和报道。同样地，SVCV的致病机理被发现包括影响细胞凋亡，造成氧化应激损伤，针对免疫系统实现免疫逃逸等。

尽管SVCV的研究较为丰富，药物研究较多，仍然缺乏行之有效的防治手段，尚无商品化的特效药。目前，研究人员尝试使用新手段治疗SVCV的感染，例如利用RNA干扰诱导病毒基因表达的沉默，但是，该方式具有成本较高，干扰RNA保存困难的缺点。另外，SVCV的疫苗开发目前尚处于探索阶段，包括灭活疫苗、弱毒疫苗、核酸疫苗和亚单位疫苗等，但尚未研发出保护率、成本、接种方式三项均满足规模化生产，能够实现市场投放的疫苗。因此，在当前的研究背景下，寻找高效安全的药物作为SVCV的防治手段仍然是首选。

发明内容

本发明的目的在于提供石蒜碱在防治鲤春病毒血症病毒(SVCV)感染中的应用，石蒜碱能够显著抑制鱼类离体培养细胞中SVCV病毒相关基因(包括g， l，m，n和p)的转录，TCID₅₀实验证实石蒜碱对于SVCV感染起到保护作用，石蒜碱能够用于制备防治SVCV感染的药物或添加剂。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

石蒜碱在防治SVCV病毒感染中的应用：在本发明的具体实施例中，感染 SVCV的EPC细胞系在加入20μM石蒜碱处理后，病毒造成的细胞病变效应被显著抑制，SVCV滴度显著降低。进一步检测细胞中病毒相关基因扩增情况显示，石蒜碱处理之后，EPC细胞中病毒相关基因(包括g，l，m，n和p)的表达被显著抑制，细胞中SVCV病毒蛋白N、P的表达水平显著降低，SVCV病毒在蛋白水平被清除，同时细胞系中抗病毒免疫相关基因(包括epcifn，epcisg15和 epcvig1)表达量基本恢复正常水平。