[发明专利]一种AIEFM@PDA为免疫标记物制备的免疫层析试纸条

说明书

本发明提供了一种AIEFM@PDA作为免疫标记物制备的免疫层析试纸条，在底板上依次搭接粘贴样本垫、喷涂有UiO‑66@PDA@Ab的玻璃纤维垫、喷涂有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水纸，制成免疫层析试纸条，用于定量检测样本中的待测物浓度，制得的试纸条具有检测灵敏度高的特点。

技术领域

本发明属于医学检验和食品安全检测领域，具体涉及一种AIEFM@PDA为免疫标记物制备的免疫层析试纸条，来定量检测样本中的待测物浓度。

背景技术

免疫层析技术是一种基于抗原抗体特异性反应的检测方法，具有检测速度快、特异性好、操作简单和费用低等优点，相比于其它方法更能满足现场大批量检测的需求，因此近年来发展迅猛，被广泛应用于食品安全、医学检验和环境污染物监测等领域。其中胶体金免疫层析试纸条是应用最广泛的一种免疫层析产品，但灵敏度较差且易受基质干扰。

荧光纳米材料是当下的研究热点，荧光纳米材料的高速发展同时带动了荧光免疫层析法的高速发展。荧光纳米材料的性能往往决定着荧光免疫层析法的性能。当下受到主要关注的热点荧光材料是聚集诱导发光材料(AIE)，相比传统染料的聚集诱导淬灭现象(ACQ)，即荧光材料随着浓度的升高而下降，相反AIE染料能够很好的克服这个问题，随着聚集态的出现，AIE染料展现出更佳的荧光性能，AIE染料已经在生物传感器、细胞成像、生物探针等领域得到了广泛的应用。

聚多巴胺(PDA)也是一种优异的表面包覆材料，能够有效的提高吸光能力以及抗体偶联效率，其合成是由盐酸多巴胺单体在碱性条件下发生的氧化自聚而形成，作为界面材料提高纳米材料的性能。此外，还可以在单独形成球形颗粒，在生物、医药等领域应用十分广泛。

发明内容

基于上述情况，本发明合成AIEFM微球，为了提高其在免疫层析技术，在其表面包覆一层聚多巴胺，较大的提高了其在偶联抗体方面的性能。AIEFM@PDA所表现出的灵敏度在免疫层析方面有望成为具备一定潜力的免疫标记物。目前，尚未有将AIEFM@PDA材料应用在免疫层析试纸条上的相关报道。

本发明的一个目的是提供一种AIEFM@PDA为免疫标记物制备的免疫层析试纸条。

本发明的另一个目的是提供上述试纸条的制备方法。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

本发明提供了一种AIEFM@PDA为免疫标记物制备的免疫层析试纸条，它包括底板以及在底板上搭接粘贴的滤纸、样本垫、玻璃纤维垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，其中，所述玻璃纤维垫包被有偶联抗体的UiO-66@PDA，该玻璃纤维垫的制备方法包括如下步骤：

AIEFM@PDA的制备：首先在干净小瓶中称取一定质量的PMMA和PMAO，并加入氯仿将其溶解至终浓度分别为20mg/mL及60mg/mL；随后称取四联苯乙烯四甲酸甲酯溶于上述PMMA/PMAO储备液中至终浓度为30mg/mL，配置完成后再准确移取480μL于2.4mL SDS水溶液中(0.25％，w/w)，在冰浴条件下，用超声破碎仪以35％功率下乳化3min。超声结束后，使用旋转蒸发仪将氯仿除去，剩下的混合物在12000rpm，4℃，20min条件下离心，弃上清，清洗两次，用0.01M NaOH将沉淀物浸泡过夜。待最后一次洗涤操作结束后，将沉淀物复溶于1.0mLBB缓冲液(0.01M，pH 8.0)，浓度为20mg/mL，4℃避光保存。在10mL的玻璃瓶中加入2mL超纯水和1.5mL的乙醇，加入2mg以上制备的AIEFM并称取1mg DA·HCl加入反应体系中，随后加入2.5mL的Tris-HCl(0.01M,pH 8.5)，避光反应4h后，12000rpm离心20min，除去体系中未反应的盐酸多巴胺，4℃避光保存。

AIEFM@PDA标记抗体的制备：向制得的AIEFM@PDA中加入待标记抗体，混匀后，孵育1h，之后，加入封闭剂，室温孵育1h，离心取沉淀，得到的沉淀复溶，制成AIEFM@PDA@Ab；