[发明专利]一种适于大肠杆菌高效表达的IsDNA序列、制备方法、重组表达质粒及工程菌

权利要求书

1.一种适于大肠杆菌高效表达的IsDNA序列，其特征在于，所述IsDNA序列如SEQ IDNO.1所示。

2.一种IsDNA序列的制备方法，其特征在于，用于制备如权利要求1所述的IsDNA序列，包括如下步骤：对Genbank ID为MG857655.1的马蓝细胞色素P450单加氧酶基因进行分析编码，并根据大肠杆菌的偏好性进行密码子偏好优化，得到IsDNA序列。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，经大肠杆菌的偏好性进行密码子偏好优化的参数具体包括：

1)所述IsDNA序列的密码子适应指数CAI优化前为0.67，优化后为0.97；

2)所述IsDNA序列中的碱基GC含量优化前以及优化后均为0.5；

3)所述IsDNA序列优化前含有NcoI、XhoI、SacI和EcoR I限制性内切酶识别位点，优化后不含NcoI、XhoI、SacI和EcoR I限制性内切酶识别位点；所述IsDNA序列的回避序列优化后移除了2个AATAAA碱基序列和1个ATTAAA碱基序列；

4)删除所述IsDNA的重复序列；优化前重复序列的最大正向和最大反向长度均为12bp，优化后最大反向长度为14bp。

4.一种表达IsDNA序列的重组表达质粒，其特征在于，含有如权利要求1所述的IsDNA序列，所述表达IsDNA序列的重组表达质粒为pET-22b-IsDNA，得到所述表达IsDNA序列的重组表达质粒的过程为：选取质粒pET-22b；在IsDNA序列的两端分别加上限制性内切酶NdeI和HindIII位点识别序列5’-CATATG-3’和5’-AAGCTT-3’；使用限制性内切酶NdeI和HindIII对pET-22b进行双酶切；将双酶切后的pET-22b与IsDNA序列进行重组，得到表达IsDNA的重组表达质粒。

5.一种表达IsDNA序列的工程菌，其特征在于，所述的工程菌含有如权利要求1所述的IsDNA序列或权利要求4所述的重组表达质粒。

6.根据权利要求5所述的工程菌，其特征在于，所述含有IsDNA序列的工程菌为BL21(DE3)/IsDNA，通过如下制备步骤制得：选取大肠杆菌BL21(DE3)；利用热击转化方法将重组表达质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中，得到表达IsDNA的工程菌。

7.根据权利要求6所述的工程菌，其特征在于，所述表达IsDNA的工程菌在生产天然的靛蓝色素中的应用。