[发明专利]一种快速检测猪轮状病毒的引物和探针、试剂盒及其使用方法

说明书

本发明涉及病毒检测技术领域，具体公开一种快速检测猪轮状病毒的引物和探针、试剂盒及其使用方法。引物和探针的序列为：上游引物为SEQ ID NO:1；下游引物为SEQ ID NO:2；探针的序列为SEQ ID NO:3。本发明引物和探针的灵敏度高，最低检测限能达到13拷贝/μL，用于RT‑RPA检测方法中，恒温条件下仅需要20min即可完成反应，且结合测流层析试纸条可实现肉眼可视化RPA检测猪轮状病毒，有利于对猪轮状病毒的早期快速诊断，同时，对仪器设备的要求低，实现了在非实验室条件下快速直观检测猪轮状病毒的目的，适用于野外现场检测，对猪场一线PoRV的快速诊断和防控具有十分重要的意义。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，尤其涉及一种快速检测猪轮状病毒的引物和探针、试剂盒及其使用方法。

背景技术

猪轮状病毒(Porcine Rotarvirus，PoRV)是呼肠孤病毒科、轮状病毒属成员，抵抗力较强，在室温环境条件下能够存活7个月，对一般温度、消毒药和酸碱度有一定的抵抗力。PoRV对各年龄猪均易感，是仔猪腹泻的主要病原之一，且1周龄以内仔猪感染后症状最为严重，病死率可达80％以上，给我国畜牧业的发展和规模化猪场的正常经营造成了严重的阻碍。PoRV为含11个双链RNA的双股RNA病毒，其中VP6基因所编码的Cap蛋白是PoRV的核心蛋白，是参与介导病毒黏膜免疫反应的特异性抗原，占病毒蛋白的50％以上。VP6基因在不同地区PoRV分离株中高度保守，其病毒检测、分型及免疫性保护过程中具有重要的诊断学意义。

目前，对PoRV的检测方法主要有传统的病原分离鉴定、酶联免疫吸附试验(ELISA)、病毒中和试验(VNT)、免疫电镜法、RT-PCR等，但用于PoRV临床快速检测上存在耗时长、成本高、技术复杂等局限。重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase polymeraseamplification，RPA)是一种核酸恒温扩增技术，现被广泛应用于人和动物病原核酸的快速检测。但是，RPA检测方法对引物和探针的要求较为苛刻，且PoRV的临床症状及病变特征与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪delta冠状病毒(PDCoV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)相似，仅通过临床症状和病理变化中非常容易误诊，造成较大的经济损失或者疫情的扩散等。因此，发展一种简便、高特异性、高灵敏度的PoRV快速检测方法，对早期防治PoRV具有十分重要的意义。

发明内容

针对现有猪轮状病毒的检测方法存在检测方法复杂、耗时长、检测条件要求苛刻及检测效率低的问题，本发明提供一种快速检测猪轮状病毒的引物和探针、试剂盒及其使用方法。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种快速检测猪轮状病毒的引物和探针，所述引物的序列为：

上游引物：5′-GGGACTATGTGGATTAATGCTGGGTCAGA-3′(SEQ ID NO:1)；

下游引物：5′-CAACAGAAATTCAACTTCTACATTACTTGGTC-3′(SEQ ID NO:2)；

所述探针的序列为：5′-AGACGTGCACTTACGACAGCTACAATTACT-THF-TGCTACCAGATGCTG-3′(SEQ ID NO:3)。