[发明专利]一种32个短串联重复序列的荧光复合扩增体系及其应用

说明书

本发明属于生物基因检测技术领域，涉及一种32个短串联重复序列的荧光复合扩增体系及其应用。本发明荧光复合扩增体系包含了30个常染色体基因座，一个性别识别以及一个辅助性别判断的Y染色体的Yindel。19个A类基因座、10个B类基因座加1个C类基因座的组合能够提供更多的遗传信息，从而提高个体的识别能力。本发明试剂盒不仅能够扩增常规各类提取样本，而且对新鲜和陈旧的血斑或唾液斑都可进行直接扩增，能够使用DNA检验技术来确认被拐卖妇女儿童身份，同时也适用于法医遗传学亲权鉴定及个体识别。

技术领域

本发明属于生物基因检测技术领域，涉及一种32个短串联重复序列的荧光复合扩增体系及其应用。

背景技术

短串联重复序列(short tandem repeat，STR)，是一类广泛存在于人类基因组中的DNA多态性基因座，因个体间DNA片断长度或DNA序列差异而成高度多态性，在基因传递过程中遵循孟德尔共显性方式遗传。常染色体STR基因座由于突变率低、稳定遗传及高度遗传多态性而广泛应用于法医学个体识别及亲权鉴定。1997年，美国正式确定了13个常染色体STR基因座为 CODIS核心STR基因座，同时建立了一系列的测试方法、评估标准和基础人员信息数据库。2009年4月，欧洲法庭科学研究机构(ENFSI)一致决定在已有的欧洲标准基因座(ESS)7个STR (D3S1358，D8S1179，D18S51，D21S11，FGA，TH01，vWA)基础上，增加了另外5个STR基因座(D1S1656，D2S441，D10S1248， D12S391，D22S1045)。

STR复合扩增荧光检测分型技术综合运用了多重复合扩增、毛细管电泳和荧光检测技术，已被广泛应用于各法医物证DNA 实验室，它具有快速、灵敏、准确、稳定、重复性好等特点，并且可以实现自动化。在我国初期STR试剂盒被国外所垄断，随着国内科研能力的提升，越来越多的自主研发的试剂盒面市。目前市场上国产灵敏度较高的常染色体试剂盒能够扩增提取样本，但是不能同时兼容直扩样本的扩增，因为直扩样本中会存在多种 PCR抑制剂。而在实际应用中，在公安机关中会留存有陈旧的直扩样本，需要重新扩增这些陈旧样本来获得比对的结果。因此需要性能更加优秀，鉴别力更强的试剂盒作为技术支撑。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术存在的上述问题，提出了一种具有亲缘识别能力强和综合检测效能高的32个短串联重复序列的荧光复合扩增体系。

本发明的目的可通过下列技术方案来实现：

一种32个短串联重复序列的荧光复合扩增体系，包括32对扩增引物，分别用于同时扩增30个常染色体STR位点，1个C 类基因座D4S2366，1个Y-Indel位点；所述30个常染色体STR 位点分别为：Amelogenin、D18S51、D21S11、D3S1358、FGA、 D8S1179、vWA、CSF1PO、D16S539、D7S820、D13S317、D5S818、 D2S1338、D19S433、TH01、TPOX、D6S1043、Penta D、Penta E、 D12S391、D1S1656、D2S441、D22S1045、D10S1248、D8S1132、 D15S659、D3S3045、D19S253、D6S477、D10S1435。

在上述的一种32个短串联重复序列的荧光复合扩增体系中， 32对扩增引物包括如下所示的序列：

D3S1358上下游引物序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示；

TH01上下游引物序列如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示；

D21S11上下游引物序列如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示；

D18S51上下游引物序列如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8所示；