[发明专利]一种提高人参不定根中PPD皂苷含量的不定根中期培育方法及培养基

说明书

本发明涉及一种提高人参不定根中PPD皂苷含量的不定根中期培育方法及培养基，该方法将诱导出的不定根接种至已灭菌的含有SH培养基的三角瓶中，进行液体悬浮培养；其中，所述SH培养基包括3/4SH、3％蔗糖、3PPM IBA、0.5PPM萘乙酸、0.3PPM激动素；培养条件为：温度23‑25℃，湿度35‑50％，培养3天；温度20‑22℃，湿度35‑50％，培养3天；温度17‑19℃，湿度35‑50％，培养3天；温度14‑16℃，湿度30‑45％，培养4天；温度11‑13℃，湿度30‑45％，培养4天，温度8‑10℃，湿度30‑45％，培养4天；全部为暗培。该培育方法能够提高人参不定根中PPD皂苷中Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd皂苷的含量。

技术领域

本发明属于人参培养技术领域，具体涉及一种提高人参不定根中PPD皂苷含量的不定根中期培育方法及培养基。

背景技术

人参皂苷包括原型人参皂苷和稀有人参皂苷，稀有人参皂苷抗癌活性远远强于原型人参皂苷。原型人参皂苷包括Ra、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rg1、 Rg2、Rf等，其中的PPD皂苷经过结构修饰可以转化为高附加值的稀有人参皂苷。

目前，人参不定根的诱导培养技术已日趋成熟，普遍应用的是，将多年生人参的鲜根洗净、消毒、切割后在含有2,4-D、6-BA和蔗糖的MS固体培养基中进行愈伤组织诱导。再将诱导出的愈伤组织移至IBA和蔗糖的MS中诱导、增殖不定根。然而，此种方式培育的人参不定根中皂苷含量偏低。

现有专利或文件公开了一些提高人参不定根中皂苷含量的方法(例如：中国专利CN 111937748 B公开了的一种提高人参不定根皂苷Rg1和Re含量的培养方法)，但现有方法并没有公开如何针对性的提高PPD皂苷的含量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高人参不定根中PPD皂苷含量的不定根中期培育方法，该培育方法通过循序降温的低温诱导方式，诱导人参不定根中PPD 皂苷的合成，同时通过对培养基的改进，保证低温环境培育时人参不定根能够正常生长，从而提高PPD皂苷中Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd皂苷的含量。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种提高人参不定根中PPD皂苷含量的不定根中期培育方法，该方法将诱导出的不定根接种至已灭菌的含有SH培养基的三角瓶中，进行液体悬浮培养；其中，所述SH培养基包括3/4SH、3％蔗糖、3PPM IBA、0.5PPM萘乙酸、 0.3PPM激动素；

培养条件为：温度23-25℃，湿度35-50％，培养3天；温度20-22℃，湿度35-50％，培养3天；温度17-19℃，湿度35-50％，培养3天；温度14-16℃，湿度30-45％，培养4天；温度11-13℃，湿度30-45％，培养4天，温度8- 10℃，湿度30-45％，培养4天；全部为暗培。

作为本发明的优选，中期培育结束后，需要将培育的不定根接种到一个已灭菌的生物反应器中继续进行培育。

作为本发明的优选，生物反应器培育时采用SH培养基，所述SH培养基包括3/4SH、3％蔗糖、5PPM IBA、3.5N的NaOH 1mL；培养时，开启空气阀，控制通气量为0.5vvm，温度23-25℃，湿度40％，培养4周，全部为暗培。

本发明的第二个目的在于提供一种提高人参不定根中PPD皂苷含量的不定根中期培养基，该培养基为SH培养基，包括3/4SH、3％蔗糖、3PPM IBA、 0.5PPM萘乙酸、0.3PPM激动素，培养时采用循序降温的低温液体悬浮培养。

本发明的优点和有益效果：

(1)本发明提供的培育方法在不定根中期培育时通过缓慢降温的低温诱导方式使最终获得的不定根中的Rb1、Rb2、Rb3、Rd的含量显著提高，同时向 SH培养基中加入IBA、蔗糖、萘乙酸、激动素，IBA与萘乙酸、激动素依一定比例混用后，能够避免低温环境下对人参不定根的生长产生影响。