[发明专利]一种同时提高人参不定根中多种人参皂苷含量的培养方法

权利要求书

1.一种同时提高人参不定根中多种人参皂苷含量的培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤S1、外植体消毒；

步骤S2、愈伤组织诱导；

步骤S3、不定根的诱导；

步骤S4、不定根中期培育：采用SH培养基在低温下进行液体悬浮培养；

步骤S5、不定根培育：超净工作台中将步骤S4培育的不定根接种到一个已灭菌的生物反应器中，生物反应器中采用SH培养基，所述SH培养基包括3/4SH、3％蔗糖、5PPMIBA、3.5N的NaOH 1mL；

培养时，开启空气阀，控制通气量为0.3-0.6vvm，温度23-25℃，湿度30-50％，培养3周；之后打开臭氧阀，通入空气与臭氧的混合气体，通气量为0.3-0.6vvm，臭氧浓度为0.15-0.2mg/m³，温度23-25℃，湿度30-50％，培养1周。

2.根据权利要求1所述的一种同时提高人参不定根中多种人参皂苷含量的培养方法，其特征在于，步骤S1外植体消毒的具体操作步骤如下：在自来水下冲洗人参，放在干净的白钢桶中，装入一定量的乙醇，乙醇浓度为70％，乙醇的量使人参完全浸没，浸泡清洗1-3min；然后利用事先灭菌的无菌水洗涤，洗去人参表面残留的乙醇溶液，之后转移至超净工作台中，把人参浸泡在浓度为2％的NaClO溶液中，浸泡时间为15-20min。

3.根据权利要求1所述的一种同时提高人参不定根中多种人参皂苷含量的培养方法，其特征在于，步骤S2愈伤组织诱导时采用易于诱导愈伤组织的MS培养基，所述MS培养基中添加生长素、细胞分裂素、蔗糖，所述生长素为2，4－二氯苯氧乙酸，细胞分裂素为6－苄基氨基嘌呤，生长素添加量为1PPM，细胞分裂素添加量为0.5PPM，蔗糖的浓度为30g/L；培养条件为：温度23-25℃、湿度30-50％、光照时间Light:8h，Dark:16h。

4.根据权利要求1所述的一种同时提高人参不定根中多种人参皂苷含量的培养方法，其特征在于，步骤S3诱导不定根的培养基采用MS培养基，所述MS培养基中添加生长激素IBA、蔗糖，所述生长激素IBA的添加量为2PPM，蔗糖的浓度为30g/L；培养条件为：温度23-25℃、湿度30-50％、暗培，诱导出不定根。

5.根据权利要求1所述的一种同时提高人参不定根中多种人参皂苷含量的培养方法，其特征在于，步骤S4不定根中期培育时，所述SH培养基包括3/4SH、3％蔗糖、3PPMIBA、0.5PPM萘乙酸、0.3PPM激动素；培养条件为：温度23-25℃，湿度40％，培养3天；温度20-22℃，湿度35％，培养3天；温度17-19℃，湿度35％，培养3天；温度14-16℃，湿度30％，培养4天；温度11-13℃，湿度30％，培养4天，温度8-10℃，湿度30％，培养4天；全部为暗培。

6.根据权利要求1所述的一种同时提高人参不定根中多种人参皂苷含量的培养方法，其特征在于，步骤S5所述的生物反应器的顶端设置有排气口，生物反应器的底部设置有进气口，所述进气口通过分管路与总进气管路连接，所述分管路上设置有进气阀；所述总进气管路与臭氧进气管路和空气进气管路连接，所述臭氧进气管路上安装有臭氧阀、第一流量计，臭氧进气管路与臭氧发生器连接；所述空气进气管路与气源连接，空气进气管路上安装有空气阀、第二流量计。