[发明专利]一种分泌抗CLas分泌蛋白R1g单克隆抗体的杂交瘤细胞株R1g1 4B4及应用

说明书

本发明公开了一种分泌抗CLas分泌蛋白R1g单克隆抗体的杂交瘤细胞株R1g1 4B4及应用，所述杂交瘤细胞株R1g1 4B4于2022年保藏在中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCC NO：C2022146，保藏地址：中国.武汉.武汉大学。本发明得到的杂交瘤细胞株R1g1 4B4分泌的抗CLas分泌蛋白R1g的单克隆抗体mAb 4B4能够识别柑橘黄龙病菌分泌蛋白R1g，通过免疫印迹反应证明单克隆抗体mAb 4B4可以特异地识别病原菌CLas的分泌蛋白R1g1。该单克隆抗体mAb 4B4可用于制备抑制或控制柑橘黄龙病的制剂、药物，从而实现防治柑橘黄龙病。

技术领域

本发明涉及柑桔黄龙病技术领域，具体地，涉及一种分泌抗CLas分泌蛋白R1g单克隆抗体的杂交瘤细胞株R1g1 4B4及单克隆抗体和应用。

背景技术

柑桔黄龙病是一种毁灭性的柑桔病害，在全世界范围内造成巨大的经济损失。柑桔植株感染黄龙病之后，叶片萎缩掉落，结实率下降，果实偏小，颜色黄绿不均，最终导致植株死亡，且柑桔黄龙病传播性极强，短期内可蔓延整个果园。柑桔黄龙病的病原菌是革兰氏阴性细菌，其具有三种致病变种，分别为亚洲种Candidatus Liberibacter asiaticus(CLas)、非洲种Candidatus Liberibacter africa nus(CLaf)、美洲种CandidatusLiberibacter americanus(Clam)。目前针对柑桔黄龙病尚无有效的治疗措施和理想的抗性品种，因此开发高效的黄龙病防治方法，控制黄龙病、及降低黄龙病的发生是当前应对黄龙病的主要方向。

目前并无有效阻断柑桔黄龙病的方法，单克隆抗体在植物病原菌中的应用起步较早，其试材的同质性和均一特异性的优点，为植物病原细菌学中细菌种、小种或系统特异抗体的制作开辟了道路，不仅替代了病害诊断和细菌检出中的多克隆抗体，而且有希望应用于细菌的生理生化及控制研究中。因此，研发能检测黄龙病病原菌分泌蛋白的单克隆抗体，可用于开发的黄龙病检测试纸，有利于控制黄龙病的发生和蔓延。目前，相关专利CN201810132721.6和CN201810132890.X分别报道过针对CLas McAb2和McAb1膜表面蛋白，设计了杂交瘤细胞株并得到其单克隆抗体。但柑橘黄龙病菌的分泌蛋白有很多种，以哪种外分泌蛋白作为抗原制作单克隆抗体检测或阻断柑橘黄龙病菌的效果最好未见报道，且目前还尚未有针对柑橘黄龙病病菌亚洲种(CLas)分泌蛋白R1g(WP_015452585.1)的单克隆抗体方面的研究报道。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种分泌抗CLas分泌蛋白R1g 单克隆抗体的杂交瘤细胞株R1g1 4B4及单克隆抗体和应用。

本发明的第一个目的是提供一种分泌抗CLas分泌蛋白R1g的单克隆抗体的杂交瘤细胞株R1g1 4B4。

本发明的第二个目的是提供一种抗CLas分泌蛋白R1g单克隆抗体mAb 4B4。

本发明的第三个目的是提供所述的杂交瘤细胞株R1g1 4B4和/或所述抗CLas分泌蛋白R1g单克隆抗体mAb 4B4在制备检测柑橘黄龙病菌CLas的R1g蛋白的药物、制剂和/ 或试剂盒中的应用。

本发明的第四个目的是提供所述的杂交瘤细胞株R1g1 4B4和/或所述抗CLas分泌蛋白R1g单克隆抗体mAb 4B4在制备抑制柑橘黄龙病菌CLas和/或柑橘黄龙病的制剂和/或药物中的应用。

本发明的第五个目的是提供所述的杂交瘤细胞株R1g1 4B4和/或所述抗CLas分泌蛋白R1g单克隆抗体mAb 4B4在制备防治柑橘黄龙病菌CLas和/或柑橘黄龙病的制剂和/或药物的应用。

本发明的第六个目的是提供所述的杂交瘤细胞株R1g1 4B4和/或所述抗CLas分泌蛋白R1g单克隆抗体mAb 4B4在制备柑橘黄龙病检测药物、制剂和/或试剂盒中的应用。