[发明专利]核酸适体-DNA甲基化酶调控miRNA嵌合体、制备方法及应用

权利要求书

1.一种核酸适体-DNA甲基化酶调控miRNA嵌合体，其特征在于，所述核酸适体-DNA甲基化酶调控miRNA嵌合体中包含有PSMA Aptamer(A10-3)-miR-145的核苷酸序列，所述PSMAAptamer(A10-3)-miR-145的核苷酸序列用于靶向识别前列腺癌细胞，调控靶基因表达并改变DNA甲基化修饰。

2.根据权利要求1所述的核酸适体-DNA甲基化酶调控miRNA嵌合体，其特征在于，所述PSMA Aptamer(A10-3)-miR-145的核苷酸序列为：

A10-3(2’-Fluoro-pyrimidine,and deoxy-T 3’-3’cap modifications)

GGGAGGACGAUGCGGAUCAGCCAUGUUUACGUCACUCCUUGUCAAUCCUCAUCGGC

miR145(anti sense)

AGGGAUUCCUGGGAAAACUGGACUU

miR145(sense)-link A10-3

5′-GUCCAGUUUUCCCAGGAAUCCCUGCCGAUGAGGAUU-3′。

3.一种核酸适体-DNA甲基化酶调控miRNA嵌合体的制备方法，其特征在于，PSMAAptamer(A10-3)-miR-145嵌合体的制备步骤包括：

S1：将每个Aptamer及RNA oligo溶解在无菌的DEPC水中，使得终浓度为100u mol/L；

S2：将样本结合分组；

S3：将适体-miRNAs混合物于95℃，5min短暂变性，然后放置在冰上冷却；

S4：退火的嵌合体在-20℃下保存。

4.根据权利要求3所述的核酸适体-DNA甲基化酶调控miRNA嵌合体的制备方法，将步骤S2中的样本进行分组，

组1：(A10-3-miR145)：A10-3/miR145(sense)-link A10-3/miR145 (anti sense)；

组2：(Con miRNA)：Neg aptamer/miR145(sense)-link Neg/miR145(anti sense)；

组3：(A10-3-con)：A10-3/Con miRNA(sense)-link A10-3/Con miRNA(anti sense)；

其中，组1形成样品1、组2形成样品2、组3形成样品3。

5.根据权利要求4所述的核酸适体-DNA甲基化酶调控miRNA嵌合体的制备方法，将起始浓度为100u mol/L的样品1、样品2和样品3，各取10ul，置于无RNA酶的八连管中。

6.根据权利要求5所述的核酸适体-DNA甲基化酶调控miRNA嵌合体的制备方法，在八连管中加70ul的DEPC水，形成终浓度为10u mol/L的PSMA Aptamer(A10-3)-miR-145嵌合体。

7.核酸适体-DNA甲基化酶调控miRNA嵌合体的应用，其特征在于，所述PSMA Aptamer(A10-3)-miR-145用于抑制前列腺癌细胞的增殖。