[发明专利]识别Phomopsis oblonga的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株PoF7

说明书

本发明公开了一种检测浙贝母叶斑病病原真菌Phomopsis oblonga的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株PoF7，所述识别P.oblonga的单克隆抗体，由保藏编号为：C2022106的杂交瘤细胞株分泌产生；所述杂交瘤细胞株命名为PoF7，于2022年5月5日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：C2022106。该单克隆抗体被用于由P.oblonga侵染引发的植物病害的鉴定、动态监测以及P.oblonga的生物学研究，通过Bal b/c小鼠腹腔注射该细胞株，即可获得大量的该单克隆抗体，与多克隆抗体相比，具有灵敏度高，纯度高，专一性强，重复性好等优点。

技术领域

本发明属于动物领域，特别涉及一种检测浙贝母叶斑病病原真菌Phomopsisoblonga 的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株PoF7。

背景技术

Phomopsis oblonga属于半知菌类、腔孢纲、球壳孢目，其有性态为间座壳属(Diaporthe)，无性态为拟茎点霉属。P.oblonga是浙贝母叶斑病的病原真菌之一，也是茎溃疡病、叶枯病、果腐病、树脂病等多种病害的致病菌，每年给农业生产造成严重损失。本发明公开的针对P.oblonga的单克隆抗体(单抗)结合酶联免疫吸附试验(ELISA) 由于具有灵敏度高、特异性强、适于大量检测田间P.oblonga的特点，为应用该抗体进行 P.oblonga的鉴定和生物学研究，监测P.oblonga感染的病害等提供技术支持。

发明内容

本发明实施例的第一方面提供了一种识别P.oblonga的单克隆抗体，由保藏编号为： C2022106的杂交瘤细胞株分泌产生。

本发明实施例的第二方面提供了一种识别Phomopsis oblonga的单克隆抗体在检测浙贝母叶斑病中的应用。

本发明实施例的第三方面还提供了一种杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株命名为PoF7，于2022年5月5日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，中国武汉市武汉大学，保藏编号为：CCTCC No：C2022106。

本发明具有如下有益效果：

(1)单抗的特异性强：该单抗与P.oblonga抗原反应强，且不与木贼镰刀菌、茎点霉菌、交链格孢、尖孢镰刀菌、灰葡萄孢、细极链格孢和茄病镰刀菌的抗原发生反应，可用于P.oblonga及其引发的浙贝母叶斑病的检测。

(2)单抗的检测灵敏度高：采用间接ELISA检测结果表明，该单抗对P.oblonga菌丝及孢子制备的抗原的检测灵敏度为10.99ng/mL(即每孔1.099ng)，具有良好的开发应用前景。

(3)单抗的类型为Igκ型的IgM。

附图说明

图1PoF7的效价检测；

图2PoF7与不同真菌抗原的反应；

图3PoF7的检测灵敏度测定；

图4PoF7抗体的类型及亚类鉴定；

图5PoF7抗体结合的P.oblonga目标蛋白；

图6PoF7检测由P.oblonga引起的浙贝母叶斑病灵敏度。

具体实施方式

以下结合附图和实施例进一步解释本发明。

实施例1：杂交瘤细胞株制备