[发明专利]一种杀虫蛋白突变体GNIP1Aa-D420L及其编码基因和应用

权利要求书

1.一种杀虫蛋白突变体GNIP1Aa-D420L，其特征在于，所述杀虫蛋白突变体GNIP1Aa-D420L是将SEQ ID No.1所示的野生型杀虫蛋白GNIP1Aa第420位的Asp突变为Leu。

2.根据权利要求1所述的杀虫蛋白突变体GNIP1Aa-D420L，其特征在于，所述杀虫蛋白突变体GNIP1Aa-D420L为A1)或A2)所示：

A1)氨基酸序列为SEQ ID No.2所示的蛋白质；

A2)在SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的N端或C端连接蛋白标签得到的融合蛋白。

3.如权利要求1或2所述的杀虫蛋白突变体GNIP1Aa-D420L的编码基因。

4.根据权利要求3所述的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示。

5.包含权利要求3或4所述的编码基因的重组载体。

6.根据权利要求5所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为将权利要求3或4所述的编码基因连接到pET-24a(+)的NotⅠ和NdeⅠ酶切位点之间，且保持pET-24a(+)的其他序列不变得到的重组载体pET-24a(+)-GNIP1Aa-D420L。

7.包含利要求5或6所述的重组载体的重组菌。

8.权利要求1或2所述的杀虫蛋白突变体GNIP1Aa-D420L的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)针对权利要求1或2所述的杀虫蛋白突变体GNIP1Aa-D420L的突变位点设计携带突变位点的引物，以含有野生型杀虫蛋白GNIP1Aa的编码基因的质粒为模板，进行定点突变PCR，获得含有杀虫蛋白突变体GNIP1Aa-D420L的编码基因的重组载体；

(2)重组载体转化宿主细胞，得到重组菌；

(3)培养重组菌，诱导表达蛋白；

(4)回收并纯化，即得杀虫蛋白突变体GNIP1Aa-D420L。

9.权利要求1或2所述的杀虫蛋白突变体GNIP1Aa-D420L在杀虫上的应用或在制备杀虫的产品上的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述虫为储粮害虫；优选的，为杀烟草甲和赤拟谷盗。