[发明专利]一种富集代谢标志物及应用

说明书

本发明属于临床医学领域，提供一种富集代谢标志物，用于判断晚期肺鳞癌患者是否适于康莱特注射液联合化疗。柠檬酸盐高表达作为富集指标富集患者，在富集患者群中康莱特注射液联合化疗的PFS较化疗显著延长，达到4.2个月。为康莱特注射液的临床精准使用提供了一种辅助性信息，为康莱特注射液联合化疗治疗晚期肺鳞癌的临床精准用药奠定重要基础。

技术领域

本发明涉及临床医学领域，涉及富集代谢标志物及应用，尤其涉及康莱特注射液联合化疗延长晚期肺鳞癌PFS的富集代谢标志物及应用。

背景技术

康莱特注射液在肿瘤治疗中应用广泛，适应症为晚期肺癌、肝癌中医证候气阴两虚者，但对气阴两虚证的判定多依据医家个人辨证思路、临床经验，因此存在较强的主观性，导致药品使用难以真正实现个体化、精准化、规范化，也导致整体患者群获益不一。因此康莱特注射液在治疗肺鳞癌应用中存在缺乏客观、可测量的使用指征这一问题。

发明内容

本发明的目的在于为康莱特注射液联合化疗治疗晚期肺鳞癌患者提供富集代谢标志物，在富集患者中康莱特注射液联合化疗较单纯化疗显著延长无进展生存期(PFS)。

一种富集代谢标志物，用于判断晚期肺鳞癌患者是否适于康莱特注射液联合化疗，包括柠檬酸盐。

一种柠檬酸盐的应用，作为判断晚期肺鳞癌患者是否在康莱特注射液联合化疗得到PFS获益的富集代谢标志物。

富集代谢标志物的检测方法，包括以下步骤：

a)采集血浆样本并于-80℃环境中储存；

b)将步骤a中的血浆样品于4℃解冻，解冻后取30μL血浆样品加入甲醇、乙腈和水涡旋混合，涡旋混合后4℃超声30min，然后于-20℃静置10min，静置10min后14000g 4℃离心20min，离心20min后取上清液进行真空干燥；

c)将步骤b真空干燥后产物加入100μL乙腈水溶液复溶，复溶后涡旋混匀，涡旋混匀后于14000g 4℃离心15min，离心15min后吸取上清作为待测品；

d)将步骤c中的待测品进行液相色谱-质谱联用检测，将检测取得的原始数据转化为mzXML格式，再进行峰对齐、保留时间校正、提取峰面积的处理，以峰面积作为柠檬酸盐的相对浓度。

上述步骤b中所述甲醇、乙腈和水的体积比为2:2:1。

上述步骤c中所述乙腈水溶液其中乙腈与水的体积比为1:1。

上述步骤d中液相色谱-质谱联用检测的色谱条件和质谱条件分别如下：

色谱条件：

柱温为25℃；流速0.5mL/min；流动相组成A：水+25mM乙酸铵+25mM氨水；B：乙腈；进样量为2μL，自动进样器温度4℃；洗脱程序：0-0.5min 95％B，0.5-7min B发生线性改变，从95％变化至65％，7-8min B继续呈线性改变，从65％变化为40％，8-9min B保持在40％，9-9.1min B从40％线性变化为95％，9.1-12min B保持于95％；

质谱条件：

分别采用ESI正离子两种模式进行检测，雾化气辅助加热气1(Gas1)：60psi，辅助加热气2(Gas2)：60psi，气帘气：30psi，离子源温度600℃，喷雾电压±5500V，一级质荷比检测范围：60-1000Da，二级离子质荷比检测范围：25-1000Da，一级质谱扫描累积时间：0.20s/spectra，二级质谱扫描累积时间：0.05s/spectra；二级质谱采用数据依赖型采集获得，以峰值强度筛选模式，去簇电压：±60V，碰撞能量：35±15eV，数据依赖型采集设置如下：动态排除同位素离子范围：4Da，每次采集10个碎片图谱。