[发明专利]一种岩藻糖基化软骨素及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种岩藻糖基化软骨素的制备方法，所述的方法包括如下步骤：

将L-岩藻糖基转移酶与底物GDP-L-岩藻糖和软骨素寡糖混合，酶促反应，得到岩藻糖基化软骨素；

优选地，所述的L-岩藻糖基转移酶Bfα1,3FT的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；

优选地，所述的L-岩藻糖基转移酶Hpα1,3FT S45F V30G的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

2.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括如下步骤：使用软骨素寡糖，在非还原端结构为D-GalNAc1-4-β-D-GlcA的GlcA O-3位使用L-岩藻糖基转移酶Hpα1,3FT S45F V30G催化进行单一位点的岩藻糖基化修饰。

3.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括如下步骤：使用软骨素寡糖，在D-GalNAc1-4-β-D-GlcA结构的所有GlcA O-3位使用L-岩藻糖基转移酶Bfα1,3FT催化进行岩藻糖基化修饰。

4.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括如下步骤：当岩藻糖基化软骨素寡糖的非还原端大于等于两个糖未岩藻糖基化修饰时，首先使用软骨素合成酶PmCS催化延伸岩藻糖基化软骨素的主链，然后在结构为D-GalNAc1-4-β-D-GlcA的GlcA O-3位使用L-岩藻糖基转移酶Bfα1,3FT或Hpα1,3FT S45F V30G催化其进一步进行岩藻糖基化修饰。

5.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述软骨素寡糖中可岩藻糖基化的GlcA与GDP-L-岩藻糖的摩尔比为0.5-2:1-4。

6.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的岩藻糖基化软骨素具有如下结构：

7.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的软骨素寡糖的制备方法包括如下步骤：将软骨素合成酶与供体底物和受体底物混合，反应，得到软骨素寡糖；

优选地，所述的供体底物选自：UDP-GalNAc、UDP-GlcA；

优选地，所述的受体底物选自：GalNAc；

优选地，所述的催化反应软骨素寡糖起始底物与糖核苷酸的摩尔比为0.5-2:1-5；

优选地，所述软骨素合成酶的浓度为0.1-2mg/mL；

优选地，所述方法还包括分离的步骤；

优选地，所述方法还包括纯化的步骤；

优选地，所述的软骨素寡糖具有如下结构：

其中，n₁为选自1-10的整数；

优选地，所述的软骨素寡糖选自如下结构：

8.权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的n₁为选自1-5的整数，优选地，所述的n₁为选自1-3的整数。

9.一种岩藻糖基转移酶，其特征在于，所述岩藻糖基转移酶的核苷酸序列如SEQ IDNO：1或SEQ ID NO：2所示，氨基酸序列如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示。