[发明专利]一种细胞玻璃化解冻液、制备方法及冷冻细胞的解冻方法在审
| 申请号： | 202210766896.9 | 申请日： | 2022-07-01 |
| 公开（公告）号： | CN114903033A | 公开（公告）日： | 2022-08-16 |
| 发明（设计）人： | 冯怀亮 | 申请（专利权）人： | 瑞柏生物（中国）股份有限公司 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京睿智保诚专利代理事务所(普通合伙) 11732 | 代理人： | 马欢欢 |
| 地址： | 252000 山东省聊城*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 细胞 玻璃化 解冻 制备 方法 冷冻 | ||
1.一种细胞玻璃化解冻液，其特征在于，包括解冻液、稀释液1、稀释液2和清洗液；
所述解冻液包括：基础液+2～8mg/ml蛋白添加物+9～11mg/ml半乳糖+8～12mg/ml谷胱甘肽+4～7mol/ml海藻糖；
所述稀释液1包括：基础液+2～8mg/ml蛋白添加物+9～11mg/ml半乳糖+7～11mg/ml谷胱甘肽+3～6mol/ml海藻糖；
所述稀释液2包括：基础液+2～8mg/ml蛋白添加物+9～11mg/ml半乳糖+6～10mg/ml谷胱甘肽+2～4mol/ml海藻糖；
所述清洗液包括：基础液+2～8mg/ml蛋白添加物。
2.根据权利要求1所述的一种细胞玻璃化解冻液，其特征在于，所述基础液为改良的人输卵管液、M199或平衡盐溶液PBS。
3.根据权利要求1所述的一种细胞玻璃化解冻液，其特征在于，所述蛋白添加物为人血清白蛋白或血清替代物。
4.根据权利要求1所述的一种细胞玻璃化解冻液，其特征在于，所述解冻液、稀释液1、稀释液2和清洗液的pH值独立为7.2～7.8。
5.根据权利要求1所述的一种细胞玻璃化解冻液，其特征在于，所述解冻液、稀释液1、稀释液2和清洗液的渗透压独立为600～700mOsm/Kg。
6.权利要求1～5任一项所述的一种细胞玻璃化解冻液的制备方法，其特征在于，所述解冻液、稀释液1和稀释液2的制备方法独立为：将蛋白添加物、半乳糖、谷胱甘肽和海藻糖依次加入基础液中混合；
所述清洗液的制备方法为：将基础液和蛋白添加物混合。
7.一种冷冻细胞的解冻方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将权利要求1～6任意一项所述的解冻液、稀释液1、稀释液2和清洗液预热；
(2)将待解冻细胞依次浸入所述细胞玻璃化解冻液的解冻液中2～5min、稀释液1中3～6min、稀释液2中2～5min、清洗液中4～8min。
8.根据权利要求7所述的一种冷冻细胞的解冻方法，其特征在于，所述待解冻细胞为精细胞或卵母细胞。
9.根据权利要求7所述的一种冷冻细胞的解冻方法，其特征在于，所述预热的温度为37.2～37.5℃。
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