[发明专利]一种毛细管电泳分离药用乳糖端基差向异构体的方法

说明书

本发明属于药物分析领域，具体公开了一种毛细管电泳分离药用乳糖端基差向异构体的方法。首先将乳糖样品溶于电泳缓冲液中，乳糖分子在水溶液中经变旋过程，其两个端基差向异构体α型和β型发生可逆性的互变，最终达到动态平衡。将含有α和β两种构型的乳糖溶液作为被分析样品，采用毛细管电泳紫外直接检测技术可实现两种构型的基线分离，无需进行衍生化及添加有机试剂。上述技术方案操作简单，环保节约，可重复性高，建立了一种新型快速高效的乳糖端基差向异构体的分离方法。

技术领域

本发明涉及一种毛细管电泳分离药用乳糖端基差向异构体的方法，属于药 物分析技术领域。

背景技术

目前，乳糖是最常用的药用辅料之一，多样化的药用乳糖产品可进一步应 用于多种类型制剂的研发。乳糖分子的特性主要体现在其不同端基差向异构体 (α型和β型)的旋光度及溶解度存在差异，该性质对制药工业有着重要的实 际指导意义。现今常用于分离乳糖α和β两种构型的色谱分析方法为高效液相 色谱(HPLC)，但该方法操作繁琐、试剂耗费量较大，并且色谱柱价格昂贵， 在微量样品检测方面存在局限性。

毛细管电泳(HPCE)技术在药学、生物学、医学和环境学中的应用体现了 其独特的优势。与传统的凝胶电泳相比，HPCE由于采用细内径毛细管，可在高 电压的条件下运行而不产生热效应。与HPLC相比，HPCE具有很多优势。HPCE 的一大特点是快速分析。在外加高电场作用下，被分析物的分析时间一般不超 过30min。HPCE可通过调节操作过程中缓冲液pH、电压、温度等条件改善分 离，无需HPLC的高压泵输运系统及大量的有机试剂和昂贵的色谱柱，HPCE 可采用微升级的试剂实现多种样品的快速分离，因此毛细管电泳更为环保、节约。除此之外，HPCE采用外加电压作为电渗流驱动力，消除了依靠压力驱动的 液相色谱中抛物线流型的径向扩散对最终获得色谱峰柱效的影响，具有更高的 分离柱效。

毛细管电泳技术用于药物分析目前主要体现在以下几方面：小分子药物及 其有关物质；手性分离；中药与天然产物；体内药物分析；大分子与生物制品 分析。然而，较少有研究将HPCE用于药用辅料的分析。

有鉴于上述的缺陷，本发明以期创设一种毛细管电泳分离药用乳糖端基差 向异构体的方法，使其更具有产业上的利用价值。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种毛细管电泳分离药用乳糖 端基差向异构体的方法。通过采用硼砂电泳缓冲液，与乳糖形成带负电的络合 物，可提高乳糖在紫外195nm处的吸光度，实现对乳糖的直接检测，无需经历 复杂的衍生化过程或使用其它昂贵的检测器。同时，该带电络合物可在电场中 发生迁移，α-乳糖和β-乳糖形成的络合物基于其电泳淌度的不同实现分离，无 需添加有机试剂，环保节约。

本发明的一种毛细管电泳分离药用乳糖端基差向异构体的方法，具体分离 步骤为：

(1)配制硼砂电泳缓冲液，采用硼酸或饱和氢氧化钠溶液调节硼砂电泳缓 冲液至不同pH值；

(2)将上述硼砂电泳缓冲液用于溶解药用乳糖样品，在室温条件配制乳糖 溶液，乳糖分子在水溶液中产生变旋现象，其两个端基差向异构体α型和β型 发生可逆性的互变，最终达到动态平衡；

(3)将上述得到的含有α和β两种构型的乳糖溶液作为被分析样品，构建 毛细管电泳紫外直接检测方法，并实现药用乳糖端基差向异构体的基线分离。

进一步的，所述步骤(1)中硼砂电泳缓冲液pH值为7～10。硼砂电泳缓 冲液在pH7条件下与乳糖形成带负电的络合物，可在电场中发生迁移。

进一步的，所述步骤(2)中硼砂电泳缓冲液pH值为10。碱性条件可加速 变旋过程，最终α型和β型达到动态平衡。

进一步的，所述步骤(2)中乳糖样品的浓度为20mg/mL。