[发明专利]微滴式数字PCR油相组合物、微滴式数字PCR组合物及其应用和试剂盒

权利要求书

1.一种微滴式数字PCR油相组合物，其特征在于，按质量份数计，包括：氟化油92-98份和PFPE-PEG-PFPE 2-8份。

2.根据权利要求1所述的微滴式数字PCR油相组合物，其特征在于，按质量份数计，包括：氟化油93-97份和PFPE-PEG-PFPE 3-7份；

优选地，按质量份数计，包括：氟化油95份和PFPE-PEG-PFPE 5份。

3.一种微滴式数字PCR组合物，其特征在于，包括权利要求1或2所述的微滴式数字PCR油相组合物和水相组合物；

所述水相组合物的溶质包括热启动Taq酶、MgCl₂、KCl、Tris-HCl、BSA、dNTP、PEG2000、甜菜碱、DMSO、甘油、鱼精DNA和Proclin-300；

所述水相组合物中，热启动Taq酶的浓度为0.08-0.12U/μL、MgCl₂的浓度为3-4mM、KCl的浓度为100-150mM、Tris-HCl的浓度为16-24mM、BSA的浓度为2-3mg/mL、dNTP的浓度为0.3-0.5mM、PEG2000的体积分数为0.6％-0.8％、甜菜碱的浓度为0.3-0.5M、DMSO的体积分数为1.6％-2.4％、甘油的体积分数为0.2-0.3％、鱼精DNA的浓度为0.4-0.6ng/μL、Proclin-300体积分数为0.03％-0.05％。

4.根据权利要求3所述的微滴式数字PCR组合物，其特征在于，所述水相组合物中，热启动Taq酶的浓度为0.1U/μL、MgCl₂的浓度为3.5mM、KCl的浓度为125mM、Tris-HCl的浓度为20mM、BSA的浓度为2.5mg/mL、dNTP的浓度为0.4mM、PEG2000的体积分数为0.7％、甜菜碱的浓度为0.4M、DMSO的体积分数为2％、甘油的体积分数为0.25％、鱼精DNA的浓度为0.5ng/μL、Proclin-300的体积分数为0.04％。

5.根据权利要求3所述的微滴式数字PCR组合物，其特征在于，所述水相组合物的溶质还包括引物对、探针和荧光素钠盐。

6.根据权利要求5所述的微滴式数字PCR组合物，其特征在于，所述引物对的浓度为600-1000nM，优选为800nM。

7.根据权利要求5所述的微滴式数字PCR组合物，其特征在于，所述探针的浓度为160-240nM，优选为200nM。

8.根据权利要求5所述的微滴式数字PCR组合物，其特征在于，所述荧光素钠盐的浓度为80-120nM，优选为100nM。

9.权利要求1或2所述的微滴式数字PCR油相组合物或者权利要求3-8任一项所述的微滴式数字PCR组合物在微滴式数字PCR中的应用。

10.一种微滴式数字PCR试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的微滴式数字PCR油相组合物或者权利要求3-8任一项所述的微滴式数字PCR组合物。