[发明专利]miR-5189-3p在头颈部鳞癌诊疗中的应用

说明书

本发明公开了miR‑5189‑3p在头颈部鳞癌诊疗中的应用。本发明实验发现，与正常人相比，miR‑5189‑3p在头颈部鳞癌患者中的表达水平明显下调；通过细胞增殖、迁移和侵袭实验发现，miR‑5189‑3p过表达可抑制头颈部鳞癌细胞的增殖，迁移和侵袭，表明miR‑5189‑3p能够应用于头颈部鳞癌的诊断和治疗，具有较好的临床应用价值。

背景技术

miRNA是一种长度为19-22个核苷酸的非编码单链RNA。它们通过沉默mRNA来发挥作用，从而在转录后水平调节基因的表达。miRNA的合成首先是由miRNA编码基因转录出pri-miRNA，随后由RNaseⅢ家族成员Drosha将pri-miRNA剪切成为长度大约为80bp的发卡结构的pre-miRNA，也是miRNA前体。最后，pre-miRNA在细胞质中被RNaseⅢ家族成员Dicer加工成双链的RNA。其中一条则与RNA沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)结合形成了RISC-miRNA复合物，随后再次结合到靶基因的mRNA的3’UTR来调控靶标。随着近期生物信息学在miRNA领域应用逐步推广和深入，科学家应用生物信息学软件对miRNA的机制进行分析，显示许多miRNA调控靶点位于与细胞癌变密切相关的肿瘤调控因子或通路上，这对于肿瘤病因学的研究具有重要意义。目前，关于头颈部鳞癌诊断的miRNA生物标志物的报道鲜见，临床治疗上需要有利于头颈部鳞癌诊断的miRNA分子的标志物。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种生物标志物miR-5189-3p在头颈部鳞癌诊断和治疗中的应用，以实现头颈部鳞癌的诊断和治疗，进一步提高患者的生存质量和生存率。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

本发明一方面提供了一种用于诊断头颈部鳞癌的生物标志物，所述生物标志物包括pri-miR-5189、pre-miR-5189、miR-5189-3p。

进一步，所述生物标志物为miR-5189-3p。

在本发明中，术语“miRNA”具有其在本领域中的普通含义，表示来自遗传基因位点的RNA分子，其从可以形成局部RNA前体miRNA结构的转录物加工而来。成熟miRNA通常长度为20、21、22、23、24或25个核苷酸，尽管其它数目的核苷酸也可存在，例如18、19、26或27个核苷酸。

miRNA编码序列具有与侧翼基因组序列配对的潜力，使成熟miRNA放置在非完全配对的RNA双链体之内(本文也称作茎-环或发夹结构或pre-miRNA)，所述双链体作为从更长的前体转录物进行miRNA加工的中间体。这一加工典型地通过分别称为Drosha和Dicer的两种特定的内切核酸酶的连续作用而发生。Drosha从初级转录物(本文也称作“pri-miRNA”)产生典型地折叠成发夹或茎-环结构的miRNA前体(本文也称作“pre-miRNA”)。采用Dicer方法切割这个miRNA前体可以得到miRNA双链体，其发夹或茎-环结构的一条臂包含成熟miRNA，另一条臂包含类似大小的节段(通常称为miRNA*)。

本发明另一方面提供了检测所述的生物标志物表达水平的试剂在制备诊断头颈部鳞癌的产品中的应用，所述试剂包括特异性识别前面所述的生物标志物的寡核苷酸探针、特异性扩增前面所述的生物标志物的引物。

在本发明中，术语“探针”是指对应于能够特异性结合mRNA的数个碱基至数百个碱基的核酸片段，例如RNA或DNA等。由于被标记，因而可以确认是否存在特定的mRNA。探针能够以寡核苷酸(oligonucleotide)探针、单链DNA(single stranded DNA)探针、双链DNA(double stranded DNA)探针、RNA探针等形式制造。在本发明中，利用与上述标志物基因互补的探针进行杂交，并且可通过是否杂交来诊断上述基因的表达水平。可以基于本技术领域中公知的技术来更改用于合适探针的选择及杂交条件，在本发明中，对此没有特别限制。