[发明专利]一种负载不同生长因子的三相仿生支架及制备方法与应用

权利要求书

1.一种负载不同生长因子的三相仿生支架，其特征在于，包括位于底部的牙槽骨层、中部的牙周膜层、上部的牙骨质层；所述牙槽骨层由四层通过纯壳聚糖凝胶粘合的电纺纳米纤维膜构成，所述构成牙槽骨层的电纺纳米纤维膜内部均含有骨形态发生蛋白2；所述牙骨质层由二层通过纯壳聚糖凝胶粘合的电纺纳米纤维膜构成，所述构成牙骨质层的电纺纳米纤维膜内部均含有重组人牙骨质蛋白1；所述牙周膜层由内部含有结缔组织生长因子的高粘度壳聚糖凝胶构成；该负载不同生长因子的三相仿生支架具体制备过程为：

（1）使用改良去溶剂法制备具有生长因子缓释功能的纳米颗粒，制备的纳米颗粒具体包括负载骨形态发生蛋白2的纳米颗粒、负载重组人牙骨质蛋白1的纳米颗粒、负载结缔组织生长因子的纳米颗粒；其中，具有生长因子缓释功能的纳米颗粒是由牛血清蛋白和高粘度壳聚糖制备得到，且作为生长因子的载体；

（2）采用静电纺丝法制备电纺纳米纤维膜，所述电纺纳米纤维膜包括内部含有骨形态发生蛋白2的电纺纳米纤维膜和内部含有重组人牙骨质蛋白1的电纺纳米纤维膜；

（3）制备内部含有结缔组织生长因子的高粘度壳聚糖凝胶；

（4）通过内部含有骨形态发生蛋白2的电纺纳米纤维膜制备牙槽骨层，通过内部含有重组人牙骨质蛋白1的电纺纳米纤维膜制备牙骨质层，以内部含有结缔组织生长因子的高粘度壳聚糖凝胶作为牙周膜层，从上到下堆叠牙骨质层、牙周膜层、牙槽骨层，使三者交联结合成一个整体，然后方向性冻干后，进行尺寸修剪后，即得三相仿生支架。

2.根据权利要求1所述的一种负载不同生长因子的三相仿生支架，其特征在于，所述三相仿生支架的长为3mm，宽为2mm，厚为0.8~1.2mm。

3.根据权利要求1或2所述的一种负载不同生长因子的三相仿生支架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）使用改良去溶剂法制备具有生长因子缓释功能的纳米颗粒，制备的纳米颗粒具体包括负载骨形态发生蛋白2的纳米颗粒、负载重组人牙骨质蛋白1的纳米颗粒、负载结缔组织生长因子的纳米颗粒；

（2）采用静电纺丝法制备电纺纳米纤维膜，所述电纺纳米纤维膜包括内部含有骨形态发生蛋白2的电纺纳米纤维膜和内部含有重组人牙骨质蛋白1的电纺纳米纤维膜；

（3）制备内部含有结缔组织生长因子的高粘度壳聚糖凝胶；

（4）通过内部含有骨形态发生蛋白2的电纺纳米纤维膜制备牙槽骨层，通过内部含有重组人牙骨质蛋白1的电纺纳米纤维膜制备牙骨质层，以内部含有结缔组织生长因子的高粘度壳聚糖凝胶作为牙周膜层，从上到下堆叠牙骨质层、牙周膜层、牙槽骨层，使三者交联结合成一个整体，然后方向性冻干后，进行尺寸修剪后，即得三相仿生支架。

4.根据权利要求3所述的一种负载不同生长因子的三相仿生支架的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，使用改良去溶剂法制备具生长因子缓释功能的纳米颗粒的具体制备过程为：

（1.1）将100mg牛血清蛋白溶解于10mL蒸馏水中，加入100μL骨形态发生蛋白2，磁力搅拌溶解10min，制得溶液A；

（1.2）使用微量注射泵，将40mL无水乙醇以2ml/min的速率泵入溶液A中，继续磁力搅拌过夜得溶液B；

（1.3）将40mg高粘度壳聚糖溶于40mL1%冰乙酸溶液，60℃水浴磁力搅拌30min后利用微量注射泵以0.5mL/min的速率泵入溶液B中，继续磁力搅拌8h得溶液C；

（1.4）收集溶液C，12000rpm高速离心20min，沉淀物用50%乙醇超声分散后再次离心，重复此润洗过程3次，收集此过程中的上清液用于载药效率分析，沉淀物则在-20℃冰箱中冻存过夜后利用真空冻干机冷冻干燥48h，即得负载骨形态发生蛋白2的纳米颗粒；

（1.5）将步骤（1.1）中加入的骨形态发生蛋白2替换为重组人牙骨质蛋白1或结缔组织生长因子，重复步骤（1.1）~（1.4），分别制得负载重组人牙骨质蛋白1的纳米颗粒或负载结缔组织生长因子的纳米颗粒。