[发明专利]一种胍基乙酸含量的测定方法

说明书

本申请涉及饲料添加剂质量控制领域，具体公开了一种胍基乙酸含量的测定方法，所述胍基乙酸含量的测定方法，包括胍基乙酸的提取工序和待测样品的分析检测工序；所述胍基乙酸的提取工序：利用溶剂对包被胍基乙酸样品进行初溶解后，加水超声溶解，继续加超纯水摇匀取上清液离心、过滤，得待测样品；所述溶剂为甲醇。本申请的测定方法中，胍基乙酸提取时间短，加标回收率高，可以提高对胍基乙酸检测结果的准确性。

技术领域

本申请涉及饲料添加剂质量控制领域，更具体地说，它涉及一种胍基乙酸含量的测定方法。

背景技术

胍基乙酸又称胍乙酸、N-咪基甘氨酸，是动物体内合成肌酸的主要内源性前体物质，而肌酸是动物机体能量代谢中的重要物质，是能量的贮存场所。已有研究表明，在日粮中补充胍基乙酸能够提高畜禽生长性能和胴体品质，从而提高生产效益；同时，外源性补充胍基乙酸可增加人和动物血液及肌肉组织内肌酸水平，且更加优越于直接补充肌酸。

胍基乙酸属于氨基酸及其衍生物，其在瘤胃中大部分会被降解，最终到达小肠被吸收的量较小。HannahFaeSpeer等人(2019)以荷斯坦牛为对象，研究发现，胍基乙酸的瘤胃降解率为47-49％。因此，如果未处理的胍基乙酸用作反刍动物的饲料添加剂，则需提供2倍的需要量才能达到生长使用要求。为了提高胍基乙酸在反刍动物中的吸收利用率，实施生产中，多采用纤维素包被、聚合物胶囊包被、酵母富集等方法对胍基乙酸进行过瘤胃保护，获得包被胍基乙酸，以提高过瘤胃率；进而降低其在反刍动物饲料中的使用量，节约饲料成本，且包被胍基乙酸不会影响反刍动物正常的瘤胃发酵功能。胍基乙酸作为新型饲料添加剂，其推荐用量为600mg/kg，最高限量为1200mg/kg。为确保胍基乙酸的合理使用和饲料安全，有必要对饲料中胍基乙酸的含量进行监测和控制。

目前，检测胍基乙酸的方法主要有高效液相色谱(HPLC)法、液相色谱-质谱联用(LC-MS)法、气相色谱-质谱联用仪(GC/MS)法、电喷雾-质谱联用(ES-MS)和酶标法等。由于包被胍基乙酸成分复杂，仪器测试前需要对产品进行分离提纯。相关技术中，胍基乙酸的检测方法是用水对产品进行提取，提取后再进行仪器测试。水提取产品存在提取时间长，且提取不完全的缺陷，进而易造成包被胍基乙酸的检测不及时和检测结果偏低。基于上述陈述，本申请提供了一种胍基乙酸含量的测定方法。

发明内容

为了解决包被胍基乙酸因提取时间长、提取不完全，最终造成检测不及时、检测结果偏低的缺陷，本申请提供了一种胍基乙酸含量的测定方法。

本申请提供了一种胍基乙酸含量的测定方法，采用如下的技术方案：

一种胍基乙酸含量的测定方法，包括以下步骤：包括胍基乙酸的提取工序和待测样品的分析检测工序；

所述胍基乙酸的提取工序：利用溶剂对包被胍基乙酸样品进行初溶解后，加水超声溶解，继续加超纯水摇匀取上清液离心、过滤，得待测样品；

所述溶剂为甲醇。

通过采用上述技术方案，胍基乙酸的提取是将包被胍基乙酸中的胍基乙酸提取出来，本申请中用甲醇代替水作为提取液，甲醇可以促进包被胍基乙酸包膜的溶解，加快胍基乙酸的溶出，不仅可以加快胍基乙酸的提取速度，还可以提高胍基乙酸的溶出程度，从而提高对包被胍基乙酸中胍基乙酸含量检测的准确性。

优选的，所述包被胍基乙酸样品与溶剂的比例为：1g包被胍基乙酸样品需要8-10ml溶剂。

优选的，所述溶剂包括甲醇与柠檬酸，甲醇与柠檬酸溶液的体积比为(4-6)：1。

通过采用上述技术方案，对包被胍基乙酸与溶剂的配比进行限定，在本申请限定的范围内，胍基乙酸的提取时间以及提取完全度均可以达到一个较优的水平；若溶剂用量低于本申请限定范围，则可能会导致胍基乙酸溶出不完全，影响检测结果；若溶剂用量高于本申请限定范围，胍基乙酸的提取时间以及提取完全度不会有进一步的优化，还会提高检测样品中杂质含量，影响检测结果。