[发明专利]鉴别新冠疫苗污染的荧光多靶PCR检测试剂盒及制备

说明书

鉴别新冠疫苗污染的荧光多靶PCR检测试剂盒及制备，涉及一种试剂盒。试剂盒设有PCR反应液瓶、酶反应瓶、标准品瓶、对照品瓶和包装盒；所述标准品瓶设有6个含4个目标基因的标准品质粒瓶；所述对照品瓶设有阴性对照品瓶和阳性对照品瓶。先构建含新冠病毒ORF1ab基因和N基因的目标片段RNA、人类RNaseP基因的目标片段的装甲RNA病毒颗粒及Vero基因的目标片段的质粒，再设计并筛选靶基因片段的引物和探针，绘制靶基因检测试剂标准曲线后，制备PCR反应液，建立样品处理方法后，制备对照品，最后完成鉴别疫苗污染的新冠实时荧光多靶PCR检测试剂盒。

技术领域

本发明涉及一种试剂盒，尤其是涉及一种鉴别新冠灭活疫苗污染的实时荧光多靶PCR检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

SARS-CoV-2PCR阳性是确诊新冠病毒感染的金标准，但疫苗核酸污染问题引起关注。一项研究发现，接种灭活SARS-CoV-2疫苗后，使用的止血贴和被接种者的手表面呈现新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测阳性(FAN G W,LIANG Y F,MA X,et al.Research studyon nucleic acid testing of hemostatic stickers used and the surface of therecipients'hands after the inoculation of inactivated SARS-CoV-2vaccine][J].Zhonghua Yu Fang Yi Xue Za Zhi,2021,55(3):406-8.)。另一项研究发现两例SARS-CoV-2“假阳性”病例，这是由于新冠灭活病毒疫苗污染了样本。TO K K等认为(TO K K,LIX,LUNG D C,et al.False COVID-19cases due to contamination by inactivatedvirus vaccine[J].Clin Infect Dis,2021)，当注射器针头从疫苗安瓿中拔出时，疫苗可能会污染瓶盖和瓶外表面。虽然污染没有感染和传播的风险，但可能导致SARS-CoV-2PCR检测假阳性(TO K K,LI X,LUNG D C,et al.False COVID-19cases due to contaminationby inactivated virus vaccine[J].Clin Infect Dis,2021)。因此，开发一种能够区分是否是新型冠状病毒灭活疫苗污染导致核酸检测假阳性的方法至关重要。

目前新冠相关的疫苗类型主要以DNA、RNA、非复制病毒载体和灭活疫苗为基础，其中灭活疫苗是通过灭活纯化在非洲绿猴肾的Vero细胞中培养的SARS-CoV-2病毒而得到的(BARRETT P N,TERPENING S J,SNOW D,et al.Vero cell technology for rapiddevelopment of inactivated whole virus vaccines for emerging viral diseases[J].Expert review of vaccines,2017,16(9):883-94)。在生产过程中很难完全去除的微量的Vero细胞衍生DNA被称为残留宿主细胞(DNAVERNAY O,SARCEY E,DETREZ V,etal.Comparative analysis of the performance of residual host cell DNA assaysfor viral vaccines produced in Vero cells[J].Journal of virological methods,2019,268(9-16).)。反转录酶-聚合酶链锁反应(reverse transcription-polymerasechain reaction，RT-PCR)方法为主的核酸检测由于在特异性和灵敏度上的优势，被认为是新冠检测的金标准而广泛接纳和采用。本发明提供了一种鉴别新冠灭活疫苗污染的实时荧光多靶PCR检测试剂盒及其制备方法。

发明内容

本发明的目的是避免由于误判阳性样本所导致的公共卫生系统和社会人力资源的浪费，提供一种鉴别新冠疫苗污染的荧光多靶PCR检测试剂盒及制备。