[发明专利]一种鉴定油菜紫色茎秆性状的分子标记引物组及其应用

说明书

本发明公开了一种鉴定油菜紫色茎秆性状的分子标记引物组及其应用，本发明通过紫秆油菜PR和绿秆油菜ZS11的变异信息，确定了与油菜茎秆颜色共分离的特异标记，进而获得了能够用于油菜茎秆颜色鉴定的引物组，所述引物组的序列如SEQ ID NO:1～4所示。利用该引物组构建的油菜茎秆颜色鉴定方法，不仅特异性好，且操作简单，可极早判断油菜植株茎秆表型，加快选育创制抗病紫秆油菜新品种的过程。

技术领域

本发明属于油菜分子育种技术领域，具体涉及一种鉴定油菜紫色茎秆性状的分子标记引物组及其应用。

背景技术

油菜是作为重要的油料作物之一，兼具蜜用、饲用、肥用、菜用、休闲观光等功能，具有重要的经济价值。然而，我国南方油菜主要以冬油菜为主，于春季开花结实，与南方雨季存在较长时间重叠，高温高湿的环境导致菌核病等病害侵染甘蓝型油菜，导致油菜大量减产，严重制约油菜产业发展。菌核病侵染油菜主要容易在茎秆等器官，导致油菜倒伏、不能完全成熟等，影响油菜产量。

紫秆油菜为远缘杂交获得的种质资源，表现为茎秆紫红色，具有较好的抗病效果，故急需一批可利用的分子标记进行早期辅助选择，以提高选择效率，减少田间种植规模和后期鉴定工作，缩短育种时间。然而目前为止还没有功能标记被应用于紫秆油菜的选育。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种能够鉴定油菜紫色茎杆形状的分子标记引物，以便于极早判断油菜植株茎秆表型，加快选育创制不同遗传背景的抗病紫秆油菜新品种。

为了实现上述目的，本发明的技术方案具体如下：

本发明基于紫杆油菜PR和绿杆油菜ZS11中的目标基因BnaMYB75.C6的序列变异信息，获得了一个与油菜茎秆颜色共分离的Indel特异标记，进而得到用于扩增检测该标记的引物，具体的，引物具体包括：

ZS11.MYB75.C6.TF：5'-GGAATCATAGATTCAAATGTTCCAA-3'(SEQ ID NO:1)，

ZS11.MYB75.C6.TR：5'-TGCATTCGCGTCTCCTGAAA-3'(SEQ ID NO:2)；

或/和ZG.MYB75.C6.TF：5'-CTGGTGTACTTTGATTCTTCTTTTAATAA-3'(SEQ ID NO:3)，

ZG.MYB75.C6.TR：5'-AGTAATGGATCATTACATATGAAAAGTAC-3'(SEQ ID NO:4)。

使用上述引物可以鉴定待测油菜植株的茎秆性状，实现极早判断油菜植株的茎秆表型，具体方法为：以待测油菜样本的DNA为模板，用上述引物进行PCR扩增，所得扩增产物进行电泳检测。

进一步地，在上述技术方案中，PCR扩增的体系为：共计12μL，模板2.0μL，2×Mix5.0μL，Primer F/R各0.5μL，ddH₂O余量。

进一步地，在上述技术方案中，所述PCR扩增的程序为：94℃预变性3min；94℃变性30sec，57℃复性30sec，68℃延伸2min，共35个循环；68℃延伸10min。

进一步地，在上述技术方案中，所述电泳检测为采用2％琼脂糖凝胶电泳检测。

进一步地，在上述技术方案中，若ZS11.MYB75.C6.TF/R检测有条带，而ZG.MYB75.C6.TF/R检测无条带，则待鉴定油菜单株为纯合绿色茎秆个体；若ZS11.MYB75.C6.TF/R检测无条带，而ZG.MYB75.C6.TF/R检测有条带，则待鉴定油菜单株为纯合紫色茎秆个体。

上述引物可直接应用于油菜茎秆颜色的选育过程中，加快选育创制不同遗传背景的抗病紫秆油菜新品种。