[发明专利]红曲发酵夏秋茶菌种筛选方法及适生性基质

说明书

本发明公开了一种红曲发酵夏秋茶菌种筛选方法，包括：菌体的活化：选取适用于食品及保健食品的4株红曲菌，分别为保藏编号CGMCCNo.3.890的橙色红曲霉、保藏编号CGMCCNo.3.4629的紫红曲霉、保藏编号CGMCCNo.3.15746的红色红曲霉、保藏编号CGMCCNo.3.7196锈色红曲霉；孢子悬浮液的制备；菌种的筛选：包括孢子悬浮液的接种、菌体干重的测定以及色价的测定。本红曲发酵夏秋茶菌种筛选方法，筛选出了最适合发酵夏秋茶的菌种红色红曲霉，红色红曲霉能改善夏秋茶的滋味苦涩、香气低的问题，将益生菌‑红曲菌与夏秋茶结合，利用生物转化获得功能性茶，能提高夏秋茶利用率，从而减少资源浪费。

技术领域

本发明涉及茶叶发酵菌种筛选技术领域，尤其涉及一种红曲发酵夏秋茶菌种筛选方法及适生性基质。

背景技术

茶树体内的生理活性物质的合成受到温度和光照的影响,夏秋季节相比春季温度高日照时间长，导致夏秋茶多酚、花青素及咖啡碱类物质含量较高，氨基酸含量较低，酚氨比变大，故滋味苦涩。

夏秋茶常存在滋味苦涩、香气低、利用率低下、资源浪费等问题，加之茶青采摘、茶叶加工的机械化程度低，技术简单、产量低、成本高，导致其销价过低，故茶园对于夏秋茶鲜叶少采甚至不采，资源浪费尤为明显。

红曲菌是真菌中的一个属，能产生红曲色素、莫纳可林K和桔霉素等多种代谢产物，故红曲霉菌具有降胆固醇、降血糖及降血压等功效。研究表明，大部分红曲菌都可以产生活性较高的蛋白酶，蛋白酶能将蛋白质水解成氨基酸、多肽等小分子化合物。利用红曲发酵夏秋茶在国内研究尚属空白，将益生菌-红曲菌与夏秋茶结合，利用生物转化，有望获得功能性茶，同时能提高夏秋茶利用率，从而减少资源浪费。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，针对夏秋茶常存在滋味苦涩、香气低、利用率低下、资源浪费的问题，提出了一种红曲发酵夏秋茶菌种筛选方法及适生性基质。

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种红曲发酵夏秋茶菌种筛选方法包括：菌体的活化：选取适用于食品及保健食品的4株红曲菌，分别为保藏编号CGMCC No.3.890的橙色红曲霉、保藏编号CGMCC No.3.4629的紫红曲霉、保藏编号CGMCC No.3.15746的红色红曲霉、保藏编号CGMCC No.3.7196锈色红曲霉，采用平板划线法分别将4株红曲菌接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基 (PDA)斜面上，置于28℃培养箱中培养7天，挑取较好菌落反复采用平板划线法将其进行活化；

步骤二：孢子悬浮液的制备：分别从4株活化好的红曲菌平板中刮取一环菌体于PDA培养皿中培养7天，用7mm打孔器分别从4株活化好的红曲菌平板中打三个菌饼于无菌PDA培养皿中，倒置培养5天，再使用30mL无菌水刮洗菌体，过滤于无菌三角瓶中，使用血球计数板计数，确保孢子浓度达10⁶cfu/mL；

步骤三：菌种的筛选：包括孢子悬浮液的接种、菌体干重的测定以及色价的测定；孢子悬浮液的接种：分别将4株红曲菌的孢子悬浮液按2％接种量接入基础培养液中，于180r/min、28℃摇瓶培养5天，每株红曲菌做三个平行；菌体干重的测定：使用烘干恒重的定量滤纸过滤发酵液，滤液用50mL离心管收集备用，滤渣用超纯水充分洗涤后置于60℃烘干至恒重，称重计算前后质量差即得菌体干重；色价的测定：参照GB1886.19-2015测定过滤后的发酵液色价。

其中，步骤三中基础培养液的制备方法为：分别称取葡萄糖1g、蛋白胨0.5g 于100mL三角瓶中，加入50mL茶汁，于121℃灭菌15min，冷却备用。

其中，茶汁的制备方法为：准确称取夏秋茶5g于茶壶中，2000mL蒸馏水煮沸3分钟，过滤，稀释2倍即得备用茶汁。

其中，通过红曲发酵夏秋茶菌种筛选方法筛选后，发现红色红曲霉为四株红曲菌株中对夏秋茶适生性最强的菌株。