[发明专利]一种检测鼠李糖乳杆菌X253的引物组合物及其应用

说明书

本发明公开了一种检测鼠李糖乳杆菌X253的引物组合物及其应用，所述引物组合物包括引物对和探针；本发明还公开了上述引物组合物的应用，应用于鼠李糖乳杆菌X253的定性和/或定量检测。本发明提供的检测鼠李糖乳杆菌X253的引物组合物，具有良好的特异性、重复性和灵敏性；应用含有该引物组合物对样品中鼠李糖乳杆菌X253进行菌株定性定量测定时更加快速、准确，可有效提高对含有鼠李糖乳杆菌X253的食品原料、中间体及成品质量安全监控的力度和效率。本发明适用于对食品中鼠李糖乳杆菌X253定性定量分析。

技术领域

本发明属于生物工程领域，涉及一种检测益生菌的引物组合物，具体地说是一种检测鼠李糖乳杆菌X253的引物组合物及其应用。

背景技术

鼠李糖乳杆菌(Lacticasei-bacillus rhamnosus)属于革兰氏阳性菌，兼性厌氧，异型发酵乳酸菌，广泛分布于动物胃肠道、生殖道、乳制品及植物材料中。如今，鼠李糖乳杆菌被广泛应用于乳制品、保健食品、动物饲料及生物医药等领域，体现了其较高的经济价值。鼠李糖乳杆菌中的鼠李糖乳杆菌X253分离筛选自新疆发酵乳，研究表明，该菌是安全性强、对人体胃肠液有较强的耐受性，同时该菌抗氧化能力强、有益口腔健康、可缓解体力疲劳，是一种具良好市场前景的潜在菌株。但当鼠李糖乳杆菌X253在食品中过量增殖时，也会影响人体的免疫机能以及肠道的菌落平衡；鼠李糖乳杆菌X253数量过低时，达不到预期的有益效果。因此，针对鼠李糖乳杆菌X253的检验也是在食品相关原料、食品的生产和质量安全中重要环节。

目前益生菌的鉴定主要分为培养法和分子生物学法。培养法主要是通过形态学、革兰氏染色和生化测试进行鉴定，非常耗时且无法对同种内菌株进行区分。分子生物学方法主要包括16S rDNA、16S-23S ITS基因序列测序方法、脉冲场凝胶电泳法、随机扩增多态性DNA分析或扩增长度多态性分析等，存在以下不足：(1)在辨别密切相关的物种和亚种方面存在局限性；(2)操作复杂、重复性差、需要专业技能或先进的硬件和软件。因此，开发一种适用于企业的简便、快速、重复性好的鼠李糖乳杆菌X253菌株水平鉴定及量化方法势在必行。

发明内容

本发明一个目的，旨在提供一种检测鼠李糖乳杆菌X253的引物组合物，以达到定性定量地检测样品中的鼠李糖乳杆菌X253的目的；

本发明的另一个目的，旨在提供上述引物组合物的应用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种检测鼠李糖乳杆菌X253的引物组合物，所述引物组合物包括引物对和探针；所述引物对，上游引物的核苷酸序列为：ggttggtcgtttgccttatca；下游引物的核苷酸序列为：ttcagtatccaccagcccacta；所述探针的核苷酸序列为：actggcccatgctt。

本发明还提供了所述检测鼠李糖乳杆菌X253的引物组合物一种应用，所述引物组合物在定性和/或定量检测鼠李糖乳杆菌X253中的应用。

作为对上述检测鼠李糖乳杆菌X253的引物组合物应用的一种限定，所述定性检测鼠李糖乳杆菌X253的方法为：收集样品菌体、提取样品DNA、qPCR扩增、分析、判定；

所述判定的标准包括，qPCR扩增产物起峰且Cq值35，则样品中鼠李糖乳杆菌X253检测结果为阳性。

作为对上述检测鼠李糖乳杆菌X253的引物组合物应用的另一种限定，根据权利要求2所述检测鼠李糖乳杆菌X253的引物组合物的应用，其特征在于，所述定量检测鼠李糖乳杆菌X253的方法包括依次进行的以下步骤：

S1.标准曲线的制作

取鼠李糖杆菌X253菌液标准品，梯度稀释，提取菌液标准品DNA作为模板进行qPCR扩增，线性拟合，建立标准曲线；

S2.样品中鼠李糖乳杆菌X253的定量测定