[发明专利]一种人质膜膜泡关联蛋白PV-1融合蛋白及其制备方法

说明书

本发明公开了一种人质膜膜泡关联蛋白PV‑1融合蛋白及其制备方法。具体地公开了氨基酸序列为SEQ ID No.1的信号肽SP1、该信号肽与PV‑1的融合蛋白(SEQ IDNo.5)以及该融合蛋白的制备方法。本发明采用信号肽SP1促进PV‑1融合蛋白真核细胞分泌表达，HEK293表达系统蛋白产量和纯度显著高于CHO表达系统。进一步研究表明PV‑1组氨酸标签融合蛋白(SP1‑PV1‑His)表达效率显著高于Fc融合蛋白(SP1‑PV1‑Fc)，其中，HEK293表达系统提高27.2倍。此外，组氨酸标签分子量小，空间位阻弱，有利于保持蛋白活性，纯化简单，更适用于大规模工业化生产，降低生产成本。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉一种人质膜膜泡关联蛋白PV-1融合蛋白及其制备方法。

背景技术

血管内皮细胞位于心血管系统的内表面，它既是感应细胞又是效应细胞，不仅能感知血液中的炎性信号、激素水平、切应力、压力等信息，而且能通过分泌多种血管活性物质对这些信息做出反应，在维持内环境渗透压平衡，血管壁完整性和阻止血栓形成中发挥重要的作用。血管内皮细胞的空隙(Trans endothelial channels，TEC)或带有隔膜的微孔(Fenestrae)或凹洞(Caveolae)是重要的亚细胞结构，在血管-组织间物质交换中发挥重要的作用。

人质膜膜泡关联蛋白(Plasmalemma vesicle associated protein，即PLVAP，简称PV-1)分子量约55-60kD，II型跨膜糖蛋白，是目前已知唯一的内皮血管微孔隔膜或质膜凹洞隔膜蛋白。早期研究证明，PV-1在内环境渗透性，白细胞迁移和血管新生中具有重要作用，近期研究表明PV-1与癌症、创伤性脊髓损伤，缺血性脑疾病或眼病密切相关。生物系统的血管-脑组织屏障和血管-视网膜屏障等内皮血管管壁上无质膜微孔或凹洞，也无PV-1蛋白表达，但病理状态下，如缺血性脑中风、脑部原发性或转移性肿瘤、糖尿病视网膜病变等情况下，血管-组织屏障结构遭到破坏，内皮血管管壁出现有微孔并伴有PV-1抗原表达。

综上所述，PV-1蛋白有望成为治疗年龄相关性黄斑变性(Age-related MacularDegeneration，AMD)、糖尿病黄斑水肿(Diabetic Macular Edema，DME)和成年患者视网膜静脉阻塞引起的黄斑水肿等疾病的新靶点。但是，目前关于PV-1靶点表达相关的文献报道较少。

发明内容

本发明的目的是提供一种可提高人质膜膜泡关联蛋白分泌效率的信号肽和/或人质膜膜泡关联蛋白融合蛋白及其制备方法。所要解决的技术问题不限于所描述的技术主题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技术主题。

为了实现上述目的，本发明首先提供了多肽，所述多肽的氨基酸序列可为SEQ IDNo.1。

所述多肽可为信号肽，名称为SP1。

所述信号肽SP1为人工改造的用于促进人质膜膜泡关联蛋白在哺乳动物细胞中分泌表达的信号肽。

本发明还提供了融合蛋白，所述融合蛋白可为包括人质膜膜泡关联蛋白和所述信号肽SP1的蛋白质。

所述人质膜膜泡关联蛋白(Plasmalemma vesicle associated protein，PLVAP，PV-1)的氨基酸序列为SEQ ID No.3，PV-1编码序列(CDS)的核苷酸序列为SEQ ID No.4。

进一步地，所述信号肽SP1(SEQ ID No.1)可连接(融合)至所述人质膜膜泡关联蛋白(SEQ ID No.3)的N端。

进一步地，所述融合蛋白还可包括组氨酸标签蛋白。

所述组氨酸标签蛋白的氨基酸序列可为HHHHHH。