[发明专利]一种利用盐单胞菌生产PHA的方法在审
申请号: | 202210803346.X | 申请日: | 2022-07-07 |
公开(公告)号: | CN115125275A | 公开(公告)日: | 2022-09-30 |
发明(设计)人: | 田道贺;沈宏伟;张恒文;孙磊;叶秀生;吕金艳 | 申请(专利权)人: | 珠海麦得发生物科技股份有限公司 |
主分类号: | C12P7/625 | 分类号: | C12P7/625;C12N1/20;C12R1/01 |
代理公司: | 常州市权航专利代理有限公司 32280 | 代理人: | 王淑敏 |
地址: | 519000 广东省珠海市横琴新区*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 利用 盐单胞菌 生产 pha 方法 | ||
1.一种利用盐单胞菌生产PHA的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将三份等体积的菌液分别置于发酵罐1、发酵罐2、发酵罐3中,三个发酵罐之间依次有管道连接并通过蠕动泵驱动菌液流动;
(2)当发酵罐1中的葡萄糖浓度低于10g/L时,开始向发酵罐1中补加料一,同时将发酵罐1中的菌液以及料二加入到发酵罐2中;与此同时,将发酵罐2中的菌液以及料三加入到发酵罐3中,同时收集发酵罐3中泵出的菌液;全程监控发酵罐1中的OD600值,当发酵罐1中菌液的OD600值低于50时,停止发酵;
整个发酵过程是个连续的过程,发酵罐1、2、3中的菌液体积均不发生变化,一直保持动态平衡;
发酵罐1、2、3中的搅拌速度均为750-800rpm;
发酵罐1、2、3中菌液的温度均为36.5℃;
发酵罐1、2、3中菌液的pH=8.5±0.1。
2.根据权利要求1所述的一种利用盐单胞菌生产PHA的方法,其特征在于,所述发酵罐1、2、3大小尺寸完全相同。
3.根据权利要求1所述的一种利用盐单胞菌生产PHA的方法,其特征在于,所述菌液由营养液和盐单胞菌培养液按照体积比10:1组成,所述营养液由营养物质与水组成,所述营养物质在水中的浓度如下:
葡萄糖60g/L
玉米浆干粉12g/L
尿素2g/L
氯化钠40-60g/L
硫酸镁0.2g/L
柠檬酸铁铵0.05g/L
无水氯化钙0.015g/L
七水硫酸锌0.1mg/L
四水硫酸锰0.03mg/L
硼酸0.3mg/L
五水硫酸铜0.01mg/L
钼酸钠0.03mg/L;
所述盐单胞菌培养液按照以下步骤制备:
(1)制备LB60液体培养基
将适量的酵母浸粉、胰蛋白胨、氯化钠溶解在水中得到培养液,并采用浓度为3M的氢氧化钠水溶液调节培养液的pH=8.0±0.3,所述酵母浸粉在水中的浓度为5g/L,所述胰蛋白胨在水中的浓度为10g/L,所述氯化钠在水中的浓度为60g/L;
(2)制备LB60固体培养基
将适量的酵母浸粉、胰蛋白胨、氯化钠搅拌混合均匀,采用浓度为3M的氢氧化钠水溶液调节培养液的pH=8.0±0.3,并加入适量琼脂粉,搅拌均匀后于121℃下高温高压灭菌20min得到LB60固体培养基,所述酵母浸粉在水中的浓度为5g/L,所述胰蛋白胨在水中的浓度为10g/L,所述琼脂粉在水中的浓度为16g/L,所述氯化钠在水中的浓度为60g/L;
(3)制备种子液
步骤a,取保存于-80℃的盐单胞菌甘油管,划线接种至LB60固体培养基上,36.5℃下培养24h;
步骤b,从步骤a的LB60固体培养基上挑取盐单胞菌重新划线接种至LB60固体培养基上,36.5℃下培养24h;
步骤c,从上一步骤b的LB60固体培养基上挑取盐单胞菌接种至盛有30mL LB60液体培养基的250mL三角瓶中,36.5℃下、220rpm/min震荡培养10h,即得到种子液;
(4)取3mL步骤(3)得到的种子液,按照1%接种体积比接种至300mL LB60液体培养基中,36.5℃下、220rpm/min震荡培养10-12h,即获得盐单胞菌培养液。
4.根据权利要求1所述的一种利用盐单胞菌生产PHA的方法,其特征在于,所述料一由营养物质与水组成,所述营养物质在水中的浓度如下:
5.根据权利要求1所述的一种利用盐单胞菌生产PHA的方法,其特征在于,所述料二由葡萄糖基液与微量元素母液按照体积比10:1组成,所述葡萄糖基液由营养物质与水组成,所述营养物质在水中的浓度如下:
葡萄糖500-520g/L
尿素7.55g/L;
氯化钠40-60g/L
所述微量元素母液由微量元素与水组成,所述微量元素在水中的浓度如下:
氯化钼0.218g/L
氯化铁9.7g/L
氯化钙7.8g/L
五水合硫酸铜0.156g/L。
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