[发明专利]一株过表达Cna1基因的重组酿酒酵母及其构建方法与应用在审
| 申请号： | 202210803808.8 | 申请日： | 2022-07-07 |
| 公开（公告）号： | CN115851467A | 公开（公告）日： | 2023-03-28 |
| 发明（设计）人： | 陈勇;李国雄;应汉杰;孙文俊;陈天鹏;余斌;石书琪 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12N15/31;C12P7/10;C12R1/865 |
| 代理公司： | 江苏圣典律师事务所 32237 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 211816 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表达 cna1 基因 重组 酿酒 酵母 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一株过表达Cna1基因的重组酿酒酵母，其特征在于，所述的重组酿酒酵母过表达Cna1基因。
2.根据权利要求1所述的重组酿酒酵母，其特征在于，所述Cna1基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
3.根据权利要求1所述的重组酿酒酵母，其特征在于，所述的酿酒酵母为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae S288c。
4.权利要求1～3中任意一项所述的重组酿酒酵母的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae S288c基因组作为模板，对目的基因Cna1进行PCR扩增得到Cna1基因片段；
(2)将步骤(1)中得到的Cna1基因片段与纯化后线性质粒pYX212相连接，得到重组质粒pYX212-Cna1；
(3)将步骤(2)中得到的重组质粒转化到E.coli DH5α感受态细胞中，提取筛选重组质粒pYX212-Cna1，并测序验证；
(4)将步骤(3)提取得到的重组质粒转入到酿酒酵母Saccharomyces cerevisiaeS288c感受态中，构建过表达Cna1基因的重组酿酒酵母菌株S288c-pCna1。
5.根据权利要求4所述的重组酿酒酵母的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的PCR扩增所用引物为Cna1-F和Cna1-R，其引物序列分别如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示。
6.根据权利要求4所述的重组酿酒酵母的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的线性质粒pYX212为经BamHⅠ酶对质粒pYX212进行单酶切后的载体，其核苷酸序列如SEQ IDNo.4所示。
7.权利要求1～3中任意一项所述的重组酿酒酵母在促进生物膜形成中的应用。
8.权利要求1～3中任意一项所述的重组酿酒酵母在发酵生产乙醇中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的重组酿酒酵母为发酵菌株，通过固定化发酵制备乙醇，发酵温度为30℃，发酵转速为200r/min。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的固定化发酵以棉纤维材料为介质。
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