[发明专利]一种代谢木糖的蛹虫草菌株及其高产虫草素的培养方法

权利要求书

1.一种蛹虫草菌株20200930147，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2021年4月19日，保藏号为CCTCC No：M 2021415，可用于虫草素的高产培养。

2.根据权利要求1所述的蛹虫草菌株内转录间隔区（ITS）序列，其碱基序列如SEQ IDNO.1所示。

3.根据权利要求1所述的蛹虫草菌株，其特征在于，所述蛹虫草菌株的生长温度为4℃~32℃。

4.根据权利要求1所述的蛹虫草菌株，其特征在于，所述蛹虫草菌株的最适生长温度为23℃~25℃。

5.根据权利要求1所述的蛹虫草菌株，其特征在于，所述蛹虫草菌株能够在以葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、果糖、蔗糖、半乳糖、麦芽糖和乳糖为单一碳源的培养基中生长。

6.根据权利要求1所述的蛹虫草菌株，其特征在于，所述蛹虫草菌株在液体静置培养条件下利用木糖的量达到60 g/L。

7.一种根据权利要求1所述的蛹虫草菌株高产虫草素的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）取蛹虫草菌株保藏种转接于马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）斜面培养基，4℃~32℃下避光培养，优选温度为25℃，避光培养5 d ~14 d，培养制得斜面母种；

2）取蛹虫草菌株斜面母种的菌块5~6块接种于沙氏Ⅱ培养基，培养基装量为20%~50%，并放入8~12颗直径4 mm玻璃珠，28℃、200 r/mim下振荡培养4 d得到菌悬液；

3）取菌悬液按3%~10%的接种量接入液体发酵培养基中，培养基装量为不低于40%，并置于20℃~28 ℃培养箱中静置培养20 d ~28 d，发酵过程中避光并避免搅动菌丝；

4）发酵结束后，过滤分离发酵液与菌丝体，收集发酵液，高效液相色谱法（HPLC）法测定发酵液中虫草素含量；洗去菌丝体表面残留培养基，烘干测定其干重。发酵液置于4 ℃下避光保存，菌丝体则置于干燥处保存。

8.根据权利要求7所述的一种蛹虫草菌株高产虫草素的培养方法，其特征在于，所述液体发酵培养基按配比成分的重量比例计包括：4%木糖、1%蛋白胨、0.5%酵母浸出粉、0.2%腺苷、0.2%精氨酸、0.25%尿素、0.1%K₂HPO₄、0.1% KCl、0.1% MgSO₄·7H₂O、1%甜菜碱、pH 6.0。

9.根据权利要求7所述的一种蛹虫草菌株高产虫草素的培养方法，其特征在于，所述液体培养基瓶用8层纱布封口，再包一层锡箔纸，115℃灭菌30 min。

10.根据权利要求7所述的一种蛹虫草菌株高产虫草素的培养方法，其特征在于，所述发酵培养基配制时，木糖配制成20%的母液，单独115℃灭菌30 min，使用前按比例加入培养基中。

11.根据权利要求7所述的一种蛹虫草菌株高产虫草素的培养方法，其特征在于，所述发酵培养基配制时，尿素配成2.5%的母液，过滤灭菌；使用前均按比例加入培养基中。