[发明专利]检测BVDV、BRV、BCoV、ETEC、沙门氏菌和CpA的液相芯片检测试剂盒

说明书

本发明提供一种检测牛病毒性腹泻‑粘膜病病毒(BVDV)、牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛源产肠毒素大肠杆菌(ETEC)、牛源沙门氏菌(Salmonella)和牛A型产气荚膜梭菌(CpA)的液相芯片检测试剂盒及其专用引物、偶联探针。利用本发明的试剂盒能够同时对BVDV、BRV、BCoV、ETEC、Salmonella和CpA进行鉴别检测，实现高通量检测的目的，且检测操作简便、特异性强、重复性好，可用于牛源原材料质检等领域。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域中的兽医动物病原检测技术领域，具体涉及一种能够同时特异性检测牛病毒性腹泻-粘膜病病毒(BVDV)、牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛源产肠毒素大肠杆菌(ETEC)、牛源沙门氏菌、牛A型产气荚膜梭菌(CpA)的液相芯片检测试剂盒及其专用引物和偶联探针。

背景技术

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)是引起牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea，BVD)的病原。BVDV属于黄病毒科瘟病毒属，是一种有囊膜包被的单股正链RNA病毒，其由一个5'-UTR、一个3'-UTR和一个可转录翻译成约4000个氨基酸残基的开放阅读框(Open reading frame，ORF)组成。根据5'-UTR基因序列的不同，可将BVDV分为1型和2型两个基因型。牛感染BVDV后，多发生腹泻、肺炎、繁殖障碍和黏膜病等，给养牛业造成极大的损失。

牛轮状病毒(Bovine Rotavirus，BRV)是引起新生犊牛病毒性腹泻病的病原，该病原属于轮状病毒(Rotavirus，RV)。RV属于呼肠孤病毒科轮状病毒属，是一种无囊膜包被的双链RNA病毒。BRV由三层衣壳构成，分为11个基因片段，分别编码6种结构蛋白(VP1～VP4、VP6、VP7)和6种非结构蛋白(NSP1～NSP6)。根据构成病毒衣壳中间层的VP6蛋白的抗原和遗传特征，轮状病毒可分为9个不同的血清群。BRV感染引起的牛腹泻病在世界范围内均有分布，极大影响了畜牧业的经济效益。

牛冠状病毒(Bovine Coronavirus，BCoV)是引起牛等反刍动物的呼吸道或消化道疾病(出现腹泻的症状)的病原。BCoV属于冠状病毒科冠状病毒属，是一种有囊膜包被的单股正链RNA病毒。BCoV的基因组从5'端到3'端编码5种结构蛋白，依次为核衣壳蛋白(N)、膜蛋白(M)、小衣壳蛋白(E)、纤突蛋白(S)和血凝素酯酶蛋白(HE)。牛感染BCoV后，会影响其生长和生产机能，给养牛业造成严重的经济损失。

致泻性大肠杆菌(Diarrheagenic E.coli，DEC)通常是引起腹泻症状的特殊血清型的大肠埃希氏菌，根据其发病机制及临床特征等，可分为肠致病性大肠杆菌(Enteropathogenic E.coli，EPEC)、肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic E.coli，EHEC)、产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli，ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(Enteroinvasive E.coli，EIEC)、肠聚集性大肠杆菌(Enteroaggregative E.coli，EAEC)和弥散黏附性大肠杆菌(Diffuse adherent E.coli，DAEC)。其中，产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是最常见的，往往感染犊牛和仔猪较多，它能导致幼畜严重腹泻和迅速脱水并导致死亡，极大影响了畜牧业的经济效益。

沙门氏菌(Salmonella)是一种无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌，主要包括邦戈尔沙门氏菌和肠道沙门氏菌两个种。沙门氏菌是引起犊牛腹泻的主要病原之一，其感染可能表现为肠道疾病、败血病和生殖疾病，严重影响犊牛健康，给养殖业生产带来负面影响。