[发明专利]一种豚鼠SOX10多克隆抗体的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种豚鼠SOX10多克隆抗体的制备方法及其应用,多克隆抗体以如SEQ ID NO.1所示核酸序列对应的蛋白产物作为抗原，免疫豚鼠后，通过抗原亲和方法从免疫后豚鼠血清中纯化获得。该抗体能够在体外培养的细胞、小鼠神经组织中特异性的识别SOX10+的少突胶质细胞。该抗体特异性标记中枢神经系统所有的不同发育阶段的少突胶质细胞和外周神经系统中的施旺细胞，在少突胶质细胞和施旺细胞发育、髓鞘形成、脱髓鞘疾病、脑肿瘤、神经损伤等相关神经科学研究中，具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种豚鼠SOX10多克隆抗体的制备方法及其应用。

背景技术

脊椎动物中枢神经系统主要由神经元、少突胶质细胞、星形胶质细胞、小胶质细胞组成。其中，少突胶质细胞主要形成包裹神经元轴突的髓鞘，从而几十倍的加快神经冲动沿神经元轴突的传导速度，以此保证脊椎动物更快更精确的运动速度。髓鞘发育障碍的小鼠模型往往导致震颤、瘫痪、癫痫等神经功能障碍。人类的髓鞘相关疾病包括脑白质营养不良、多发性硬化症等，都会导致个体严重的神经功能障碍甚至死亡。此外，与其他中枢神经系统起源的神经细胞类型不同，少突胶质细胞前体细胞在整个动物生命周期中都具有增殖能力，因此是很多脑肿瘤，尤其是胶质瘤的起源细胞。因此，少突胶质细胞的发育及其相关疾病研究是神经科学研究的重要组成部分。

然而，要研究少突胶质细胞，首先需要能够再体内体外水平对少突胶质细胞进行特异性的标记，这就需要少突胶质谱系细胞特异性的抗体(少突胶质谱系细胞指各种发育阶段的少突胶质细胞的总称，包括少突胶质前体细胞、正在分化的少突胶质细胞、成熟的少突胶质细胞)。之前的研究多以Olig2作为少突胶质谱系细胞的标记物。但是，越来越多的研究证实，Olig2并不是一个好的少突胶质谱系细胞的标记物。原因在于：首先，在神经前体细胞产生少突胶质前体细胞之前，Olig2已经表达于神经前体细胞中；其次，Olig2同时表达在新生和幼年动物的星形胶质细胞中，只在成年动物脑中才特异性标记少突胶质谱系细胞。相比之下，SOX10在中枢神经系统中只特异性标记少突胶质谱系细胞，既不标记神经前体细胞，也不标记星形胶质细胞。此外，SOX10既标记中枢神经系统的少突胶质谱系细胞，也标记外周神经系统的髓鞘形成细胞，即施旺细胞。但由于长期以来缺乏可靠的SOX10抗体，导致研究者们普遍使用Olig2作为少突胶质谱系细胞的标记物。然而，这一做法会导致研究结果的不准确甚至是错误。为了解决这一少突胶质谱系细胞的标记准确性问题，本发明提供了一种制备豚鼠SOX10多克隆抗体的制备方法，并列举了几种应用场景。

发明内容

本发明提供了一种豚鼠SOX10多克隆抗体的制备方法及其应用，以解决现有技术的上述问题。

一种豚鼠SOX10多克隆抗体，抗体为SEQ ID NO.1所示核酸序列对应的蛋白产物作为抗原。

作为优选的技术方案，所述抗体为特异性识别SOX10的多克隆抗体。

作为优选的技术方案，所述抗体为豚鼠来源的SOX10的多克隆抗体。

作为优选的技术方案，所述抗体经抗原亲和纯化。

作为优选的技术方案，所述抗体特异性识别小鼠、大鼠、狗、鸡与人的SOX10蛋白，不识别SOX10的同源物SOX9与SOX8。

本发明还公开了一种制备如权利要求1所述的豚鼠SOX10多克隆抗体的方法，包括下列步骤：

1)将小鼠SOX10的C端片段对应的DNA片段与谷胱甘肽转移酶GST的DNA片段融合，再克隆到原核表达载体pEASY中，提取质粒后转入包含λ噬菌体DE3区的大肠杆菌BL21表达菌株中，IPTG诱导携带6xHis标签的目标蛋白表达；

2)通过镍柱从细菌裂解液的上清液中纯化目标蛋白；

3)以纯化后的目标蛋白免疫豚鼠，并在免疫结束后获取豚鼠血清；