[发明专利]一种拮抗土传病害的菌株及其筛选、鉴定方法和应用

说明书

本发明公开一种拮抗土传病害的菌株及其筛选、鉴定方法和应用，从醋醅中分离筛选并鉴定了暹罗芽孢杆菌（Bacillus siamensis），保藏编号为：CCTCC NO：M 20221003，和贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis），保藏编号为：CCTCC NO：M 20221004两种菌株。这2株菌的基因序列中均富含抗菌肽的生物合成基因，可有效拮抗尖孢镰刀菌（F.oxysporum），达到生物防治由尖孢镰刀菌引起的土传枯萎病的目的。本发明还提供由该两菌株的应用方式，其制备的农用微生物菌剂及生物有机肥，能有效降低作物感染枯萎病的概率，具有良好的农业应用价值。

技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及一种拮抗土传病害的菌株及其筛选、鉴定方法和应用。

背景技术

土传病害是指病原体如真菌、细菌、线虫和病毒随病残体生活在土壤中，条件适宜时从作物根部或茎部侵害作物而引起的病害，其中真菌为主，分为非专性寄生与专性寄生两类。尖孢镰刀菌（ F.oxysporum）是一种世界性分布，寄主范围广泛，既可侵染植物又可在土壤内生存的兼性寄生土传病原真菌。其具有多种专化型，可引起瓜类、茄科、香蕉、棉、豆科及花卉等100多种植物枯萎病的发生。尖孢镰刀菌作为病原菌从根部为害植物，引起维管束病害，造成植株枯死，在植株的全生育期均可发生。以瓜类枯萎病为例，据报道，病田减产20%～30%，严重可达50%～60%，甚至绝产。因此，尖孢镰刀菌的防治成为农业生产领域重点研究课题。

目前，对于枯萎病的防治方法有培育抗病品种、使用化学药剂和利用农业措施等，但由于尖孢镰刀菌引起的枯萎病属于土传病害，上述的防治方法的防治效果往往都不太理想。因此，以生物防治为主导的综合防治措施，对致病性尖孢镰刀菌防治具有非常重要的意义。研究证明，致病性尖孢镰刀菌生防因子种类包括真菌、细菌、植物提取物、放线菌等。其中，存在生物防治潜力的生防细菌有18个属，其抑菌机制主要为营养基质的竞争、生态位的排斥、产生嗜铁素和抗菌素等。

针对尖孢镰刀菌的生防细菌主要有假单胞菌（ Pseudomonas）和芽孢杆菌（ Bacillus）两大类群。贝莱斯芽孢杆菌( Bacillus velezensis)是芽孢杆菌属的一个新种，其在自然界中广泛分布，具有快速生长和稳定的良好特性，且其易于分离和培养，对人类和动物无害，不污染环境，同时其代谢产物丰富，具有广谱抗菌活性和较强的抗应激能力，因此在农业生产上是开发生物药剂潜力较大的微生物，并发挥着越来越重要的作用。暹罗芽孢杆菌（ Bacillus siamensis）又译为西姆芽孢杆菌，其于2010年被刊物InternationalJournal ofSystematic and Evolutionary Microbiology收录为有效种名，属芽孢杆菌科芽孢杆菌属。研究表明，罗芽孢杆菌对常见病害真菌具有强大的拮抗能力，对镰刀菌属的尖孢镰刀菌（Eoxysporun-14）具有80%左右的拮抗作用；其对尖孢镰刀菌的抑菌原理是其在生长代谢过程中产生有很好抑菌效果的抑菌肽。羊毛硫肽化合物（Lanthipeptides）是由核糖体合成并经过翻译后修饰得到的具有丰富的结构和生物活性多样性的抑菌肽。研究表明，羊毛硫肽具有丰富的结构和生物活性多样性的，是芽孢杆菌的生物防治过程中主要作用成分，它们主要作用于病原菌细胞膜的磷脂双分子层，改变细胞膜通透性和功能性，从而抑制病原微生物的生长，在生物农药研究越来越广泛。