[发明专利]高亲和力单域抗体或其抗原结合片段及其应用

说明书

本发明公开了高亲和力单域抗体或其抗原结合片段及其应用。具体涉及一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体包括重链可变区(VHH)，所述重链可变区包括以下根据Kabat编号的互补决定区(CDR)或其突变：氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的CDR1；氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示的CDR2；和氨基酸序列如SEQ ID NO:11或14所示的CDR3；其中，所述突变为在所述VHH的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列的基础上分别具有5、4、3、2或1个氨基酸的插入、缺失或替换。本发明制备获得的抗体对包含如SEQID NO:1所示的人α链的抗原具有高亲和力结合，序列新颖。

技术领域

本发明涉及纳米抗体技术领域，具体而言，涉及一种抗体或其抗原结合片段、以及所述抗体或其抗原结合片段的制备方法和应用。

背景技术

垂体前叶激素包括人绒毛膜促性腺激素(HCG)、促卵泡激素(FSH)、促卵泡激素CTP融合蛋白(FSH-CTP)、人促黄体生成素(hLH)、垂体前叶分泌的激素(TSH)，均是由α和β二个单位通过离子键和疏水键结合在一起，其中α亚单位是垂体前叶激素所共有的亚基，而β亚单位则存在差异，在免疫活性上可予区别。

HCG是由胎盘绒毛膜的合体滋养层产生的一种糖蛋白。血清中的HCG水平检查，可以为早期妊娠的诊断及异位妊娠、葡萄胎、不完全流产、精原细胞睾丸癌等与HCG相关性疾病的诊断、鉴别诊断及判断预后提供临床依据。

FSH是由脑垂体前叶释放的促性腺激素，对女性的卵泡发育成熟和男性的精子发育具有重要意义。测定血清促卵泡激素对了解垂体内分泌功能，间接了解下丘脑及卵巢的功能状态、预测排卵时间、对不孕和内分泌疾病的诊断治疗都有重要的意义。FSH-CTP是指FSH的CTP融合蛋白，其作用为延长FSH的体内半衰期。

hLH是由腺垂体分泌的一种促性腺激素，它的主要作用于性腺，导致卵泡成熟，以及进一步分泌雄激素，排卵以及黄体的生成和维持。在临床上可以用来鉴别闭经的原因，监测排卵期等。排卵期的监测有助于不孕不育的诊断和研究避孕药物的作用机制。

TSH是垂体前叶分泌的激素之一，其主要功能是控制、调节甲状腺的活动。测定血清(浆)中的促甲状腺激素是诊断和治疗甲状腺功能亢进症和甲状腺功能减低症以及研究下丘脑-垂体-甲状腺轴的重要指标之一。在诊断甲状腺功能低下和鉴别诊断原发性和继发(下丘脑性或垂体性)甲状腺功能低下等方面是不可缺少的工具。甲状腺功能亢进症和甲状腺功能减低症治疗时，其TSH可作为疗效的判断指标。此外还可用于观察垂体TSH的储备功能，并可进一步区别下丘脑和垂体的病变。TSH检测是查明甲状腺功能的初筛试验。游离甲状腺浓度的微小变化就会带来TSH浓度向反方向的显著调整。

这类激素在血液中的含量低，需要灵敏、高效、稳定性高的检测抗体，以有效检测或者监控血液中激素的含量。现有技术的相关抗体存在结合活性低等缺陷，没有能够高效结合HCG、FSH、hLH、TSH、FSH-CTP等共有α链的抗体。

羊驼血清中存在的一种天然缺失轻链的抗体，即重链抗体(heavy-chainantibody，hcAb)。而单域重链抗体(single domain antibody，sdAb)是指仅由重链抗体可变区(Variable region)组成的基因工程抗体，又称为VHH抗体(variable domain ofheavychain of heavy-chain antibody，VHH antibody)或纳米抗体(Nanobody，Nb)或单域抗体。与传统抗体相比，单域抗体具有分子量小，稳定性高，水溶性好等优点。

发明内容