[发明专利]还原响应型的核酸递送载体及其制备方法、应用

说明书

本发明提供了一种还原响应型的核酸递送载体及其制备方法、应用，涉及核酸递送的技术领域，本发明的核酸递送载体为阳离子纳米粒子，主要由以下方法制备而成：胱胺、乙二胺与异氰尿酸三缩水甘油酯经氨基‑环氧开环聚合反应后得到核酸递送载体。本发明的制备方法简单高效，解决了阳离子纳米粒子的核酸递送载体功能单一的技术问题，达到了阳离子纳米粒子的核酸递送载体进一步地功能化，具有还原响应键，能够在细胞内特异性地释放核酸，而且能够在细胞内被降解，不仅能够加速释放核酸、提高转染率，还能够降低细胞毒性的技术效果。

技术领域

本发明涉及核酸递送的技术领域，尤其是涉及一种还原响应型的核酸递送载体及其制备方法、应用。

背景技术

骨肉瘤是最常见的骨组织原发恶性骨肿瘤，多发于儿童和青少年的股骨远端、胫骨近段或肱骨，因为发病初期的症状与生长痛类似，所以常导致确诊较晚。骨肉瘤的治疗模式一般为“化疗-肿瘤切除-术后辅助化疗”，能够使患者的五年生存率提高到60～70％。然而，骨肉瘤具有高度侵袭性，会转移到肺部及其他骨骼处，在发生转移后，病人的总体五年生存率不及20％。总之，骨肉瘤恶性程度高、好发于青少年，而且致残致死率高，而在目前的治疗模式下，肿瘤的耐药性问题却仍然非常棘手。因此，科研工作者们一直积极地寻求新的骨肉瘤疗法。

miRNA作为mRNA的表达调节剂，参与基本细胞过程，例如发育、分化、增殖、衰老和死亡等，人类基因组包含超过1000个miRNA，并且每个miRNA在特定条件下可调节数百个基因，因此癌症的发生也常常与miRNA的失调有关。Diao等人通过分析120名骨肉瘤患者和健康志愿者的血浆发现，骨肉瘤患者血浆中的miR-22表达水平显著低于健康组，并且在骨肉瘤患者中，miR-22的表达水平还与肿瘤大小、临床分期、肿瘤远处转移以及术前化疗的不良反应(例如化疗耐药)相关。针对miR-22治疗骨肉瘤的报道也是层出不穷，例如miR-22可以通过PI3K/AKT/mTOR途径抑制自噬，从而促进骨肉瘤对化疗药顺铂的敏感性；例如miR-22通过靶向HMGB1和抑制HMGB1介导的自噬抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移；例如miR-22通过诱导细胞周期停滞促进骨肉瘤细胞凋亡。因此，miR-22不仅有希望作为骨肉瘤的诊断标志物，还有很大的潜力成为骨肉瘤治疗的靶标。

递送载体是基因治疗中的一个关键环节，其中的病毒载体虽然转染效率高，但是却存在着细胞毒性大、免疫排异以及难以大规模制备等的缺点，而非病毒载体在递送载体领域却备受瞩目，特别是其中的阳离子聚合物基因载体，由于具备免疫原性低、分子结构设计灵活以及后修饰方便等的优点，受到了研究者的广泛关注。Duan等人通过“一锅法”，利用氨基与环氧基的开环反应制备了低毒、高效的多羟基阳离子聚合物基因载体TE，该方法的优点在于制备过程简易、原料价廉易得，但是此载体的功能单一，因此需对其进行进一步功能化，以满足更高的需求。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种还原响应型的核酸递送载体，具有还原响应键，能够在细胞内特异性地释放核酸，不仅能够在细胞内被降解，而且还能够加速释放核酸、提高转染效果，同时降低细胞毒性。

本发明的目的之二在于提供一种还原响应型的核酸递送载体的制备方法，工艺简单，高效。

本发明的目的之三在于提供一种还原响应型的核酸递送载体的应用，具有突出的核酸递送效果。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

第一方面，一种还原响应型的核酸递送载体，所述核酸递送载体为阳离子纳米粒子，结构如下：

第二方面，一种核酸递送载体的制备方法，包括以下步骤：

胱胺、乙二胺与异氰尿酸三缩水甘油酯经氨基-环氧开环聚合反应后得到所述核酸递送载体。

进一步的，所述制备方法包括以下步骤：