[发明专利]一株枯草芽孢杆菌及其应用在审
| 申请号： | 202210834070.1 | 申请日： | 2022-07-14 |
| 公开（公告）号： | CN116004417A | 公开（公告）日： | 2023-04-25 |
| 发明（设计）人： | 柏文琴;郑宏臣;谭明;郑雯;付晓平;赵兴亚 | 申请（专利权）人： | 中国科学院天津工业生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N9/10;C12P19/56;C12P33/20;C12R1/125 |
| 代理公司： | 北京知文通达知识产权代理事务所(普通合伙) 16051 | 代理人： | 欧阳石文 |
| 地址： | 300450 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 枯草 芽孢 杆菌 及其 应用 | ||
1.一种制备糖基转移酶的方法，其特征在于，利用保藏编号为CGMCC No. 19322的枯草芽孢杆菌制备。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其通过发酵所述枯草芽孢杆菌得到发酵液，离心取上清液即可；优选地，进一步通过纯化获得更纯的糖基转移酶。
3.一种制备莱鲍迪苷E的方法，其特征在于，以甜菊糖和莱鲍迪苷A混合物为底物，以及UDP、蔗糖合酶、蔗糖和如权利要求1或2所述的糖基转移酶构成反应体系，反应生成莱鲍迪苷E；或者以甜菊糖和莱鲍迪苷A混合物为底物，以及UDPG和如权利要求1或2所述的糖基转移酶构成反应体系，反应生成莱鲍迪苷E；
优选地，反应pH值为5-10，更优选为7-9；
优选地，反应温度为15-45℃，更优选为30-40℃；
优选地，UDP用量1mM-10mM，优选为2mM-8mM，更优选为3mM-6mM；
优选地，底物浓度(mg/ml)和酶活力(U/ml)比值为5:1；
优选地，反应时间5-20h，更优选为10-15h。
4.一种制备莱鲍迪苷D和莱鲍迪苷E混合物的方法，其特征在于，在如权利要求3所述方法中的反应体系的基础上，延长反应时间以生成莱鲍迪苷E和莱鲍迪苷D的混合物，优选地反应时间15-50h，更优选为30-40h；
优选地，反应pH值为6-10，更优选为9-10；
优选地，反应温度为25-45℃，更优选为30-40℃；
优选地，UDP用量1mM-10mM，优选为2mM-8mM，更优选为3mM-6mM；
底物浓度(mg/ml)和酶活力(U/ml)比值为2：1至30:1，优选为2：1到10：1，而综合莱鲍迪苷E的产率，优选底物浓度与酶活力为5：1。
5.如权利要求3或4所述的方法，在反应到确定时间后加入甲醇终止反应；反应体系采用Tris-HCl缓冲液。
6.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述甜菊糖和莱鲍迪苷A混合物是由甜菊叶提取制备得到的。
7.一种甜味剂的制备方法，其特征在于，由如权利要求5所述的方法反应后的混合物作为甜味剂。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，进一步纯化获得莱鲍迪苷E、莱鲍迪苷D的混合物以及未完全转化的甜菊糖和莱鲍迪苷A构成混合物。
9.如权利要求7或8所述的方法制备得到的甜味剂。
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