[发明专利]H5和H9亚型禽流感病毒双重纳米PCR检测的引物组、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 202210837159.3 | 申请日： | 2022-07-15 |
| 公开（公告）号： | CN116083641A | 公开（公告）日： | 2023-05-09 |
| 发明（设计）人： | 谢芝勋;李孟;李丹;谢丽基;罗思思;张民秀;李小凤;阮志华;谢志勤 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 南宁颂博远信知识产权代理事务所(普通合伙) 45141 | 代理人： | 兰亚君 |
| 地址： | 530001 广西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | h5 h9 禽流感 病毒 双重 纳米 pcr 检测 引物 试剂盒 方法 | ||
1.一种通过双重纳米PCR检测H5和H9亚型禽流感病毒的引物组，包括引物H5-F、引物H5-R、引物H9-F、引物H9-R，其特征在于：所述引物H5-F的序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物H5-R的序列如SEQ ID NO.2所示，所述引物H9-F的序列如SEQ ID NO.3所示，所述引物H9-R的序列如SEQ ID NO.4所示。
2.一种含有权利要求1所述引物组的试剂或试剂盒。
3.一种如权利要求1所述引物组在通过双重纳米PCR检测H5和H9亚型禽流感病毒的方法。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)提取待测样品的cDNA；
(2)建立双重纳米PCR反应体系，利用上述引物组进行双重纳米PCR反应；
(3)将PCR反应产物通过琼脂糖凝胶电泳检测，当样品扩增出219bp和515bp条带时，说明该样品分别为H5和H9亚型禽流感病毒；当样品只扩增出219bp条带时，说明该样品为H5Ny(y＝1-9)亚型禽流感病毒；当样品只扩增出515bp时，说明该样品为H9Nx(x＝1-9)亚型禽流感病毒。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)中双重纳米PCR反应体系为：2×Nano-QPCR buffer12.5μL，Taq DNA polymerase(5U/μL)0.8μL，待测样品cDNA模板2μL，引物H5-F和H5-R(20pmol/μL)加入量为1μL，引物H9-F和H9-R(25pmol/μL)加入量为0.6μL，加入ddH2O补足至终体积至25μL。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(2)中双重纳米PCR反应条件为：94℃3min；进入94℃20s，46℃30s，72℃30s，共30个循环；然后再72℃延伸5min，最后4℃结束反应。
7.权利要求1所述引物组或含有该引物组的试剂盒在检测H5和H9亚型禽流感病毒中的应用。
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